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            青島捷世康生物科技有限公司
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            厭氧培養(yǎng)系列
            elisa試劑盒
            兔ELISA試劑盒
            培養(yǎng)基
            標(biāo)準(zhǔn)品
            化學(xué)試劑
            實驗室耗材
            透析袋
            層析柱
            凝膠過濾填料
            疏水層析填料
            親和層析填料
            離子交換填料
            溶液
            抗體
            測試盒
            人ELISA試劑盒
            大鼠ELISA試劑盒
            小鼠ELISA試劑盒
            染色試劑盒
            染液
            標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
            載體菌株

            尿蛋白檢測試劑盒(麗春紅比色法)說明書

            時間:2021/1/22閱讀:1933
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            產(chǎn)品簡介:

            在尿液樣本中加入蛋白沉淀劑和麗春紅S,離心,蛋白質(zhì)-染料復(fù)合物被沉淀下來,將沉淀物加入堿性溶液溶解后,分光光度法檢測560nm處吸光度,計算蛋白含量。Leagene 尿蛋白檢測試劑盒(麗春紅比色法)主要用于定量檢測尿液中蛋白含量,較雙縮脲法靈敏,對白蛋白的敏感性比球蛋白要高。

             產(chǎn)品組成:

                                 規(guī)格 

            名稱

             

            100T

            儲存

            試劑(A): 磺基水楊酸溶液

            100ml

            RT 避光

            試劑(B): 麗春紅S試劑(10×)

            10ml

            RT 避光

            試劑(C): Alkaline Buffer

            200ml

            RT

            試劑(D): 蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)

            20mg

            RT

            試劑(E): 蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液

            1.5ml

            RT

            使用說明書

            1份

            自備材料:

            1. 蒸餾水
            2. 離心管、試管
            3. 比色杯、分光光度計

            操作步驟(僅供參考)

            1. 取適量麗春紅S試劑(10×),按1:9加入蒸餾水,稀釋至1×,室溫可保存2~3個月。
            2. 1ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)中,充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液,配制后可立即使用,溶解后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)-20℃保存。
            3. 取適量20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn),稀釋至濃度分別為0、200、400、600、800、1000、1200、1600μg/ml或所需濃度。特別提示:待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中;例如待測蛋白溶解于蔗糖中,亦取20mg/ml蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶解于蔗糖中,一般也可以用0.9%NaCl或PBS作為溶解BSA稀釋液。稀釋后的蛋白標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)-20℃長期保存。
            4. 制作蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線: 各取100μl上述稀釋度的蛋白標(biāo)準(zhǔn), 與測定樣本操作相同(見第6步) 。0號管空白調(diào)零,比色杯光徑1cm,560nm比色,制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。

                   5.半定量實驗:取3~5ml新鮮尿液轉(zhuǎn)移入小試管,滴加磺基水楊酸溶液3~4滴,形成界  面,立即觀察,如有渾濁,提示尿液中含有蛋白質(zhì),渾濁深淺表示含量多少。?

            陰性(-)

            不顯渾濁

            可疑(±)

            輕微渾濁,隱約可見,含蛋白量約為0.05~0.2g/L

            (+)

            明顯渾濁,無顆粒出現(xiàn),含蛋白量約為0.3g/L

            (2+)

            稀薄乳樣渾濁,出現(xiàn)顆粒,,含蛋白量約為1g/L

            (3+)

            乳濁,有絮片狀沉淀,含蛋白量約為3g/L

            (4+)

            絮片狀沉淀,含蛋白量>5g/L

                    6.取離心管,根據(jù)上述半定量實驗測得的蛋白濃度按下表要求加入待測樣本和蒸餾水,再加入1ml 1×麗春紅S試劑,混勻。3500g離心10min,將上清緩緩倒出后,倒置于濾紙上數(shù)分鐘,用濾紙條吸附管壁上多余的試劑(勿觸及管低沉淀)。再加入2ml Alkaline Buffer至沉淀中,充分混合使沉淀溶解。

            蛋白濃度

            待測樣本

            蒸餾水

            <1g/L

            100μl

            1~3g/L

            50μl(測得值×2)

            50μl

            >3g/L

            10μl(測得值×10)

            90μl

             7、分光光度計測定560nm波長處的吸光度,如無560nm,540~595nm之間的波長也可,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品的蛋白濃度。
             

            參考區(qū)間: 46.5±18.1 mg/L

            注意事項:

            1.蛋白標(biāo)準(zhǔn)(BSA)粉末溶解于蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液后,即獲得蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液,該原液中含有防腐劑,不影響后續(xù)檢測,該蛋白標(biāo)準(zhǔn)原液-20℃長期保存。

            2.待測蛋白溶解于什么樣的稀釋液中,蛋白標(biāo)準(zhǔn)也宜溶解于什么樣的稀釋液中,否者待測蛋白與蛋白標(biāo)準(zhǔn)中所含非蛋白成分不一致,有可能導(dǎo)致測定不準(zhǔn)確。

            3.待測樣本蛋白含量<0.1g/L時,可用1ml樣本加0.1ml麗春紅S試劑(10×),混勻,余下操作同上。

            4.本試劑盒也可以用酶標(biāo)儀檢測,可檢測1000T以上。

            5.本法較為靈敏,較比濁法誤差小,膽紅素<4mg/L時對結(jié)果無影響,也不受室溫影響。為了加快BCA法測定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱,但是切勿過熱。室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20凍存。

            6.離心沉淀后上清液必須全部去除,但不損失沉淀物,否則可影響比色結(jié)果為了加快BCA法測定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱,但是切勿過熱。室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后-20凍存。

            7.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

            有效期: 12個月有效。蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制成溶液后應(yīng)-20℃凍存。

             

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