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免疫復(fù)合物的純化
蛋白A或蛋白G微球(用含0.02％疊氮鈉裂解緩沖液配成10％(V／V)的混懸液，4℃保存)
不含DTT的Laemmli樣品緩沖液(2％SDS、10％甘油、60mmol／LTris，pH6.8和0.02％溴酚藍(lán))
搖床、抽吸裝置(大多是通過(guò)導(dǎo)管與負(fù)壓瓶一室內(nèi)真空器連接)
蛋白A或蛋白G微珠混懸液可在用前準(zhǔn)備，4℃保存于含疊氮鈉的溶液中。
2) 冰上孵育1h。高親和力的結(jié)合反應(yīng)在1h內(nèi)完成。因而，1h的孵育時(shí)間可使大部分的抗體完成反應(yīng)。
3) 在抗體-抗原反應(yīng)液中加入100ul蛋白A或蛋白G微球(用裂解緩沖液配制成10％混懸液)，4℃搖動(dòng)孵育1h。
盡管有些操作手冊(cè)建議反應(yīng)過(guò)夜，但實(shí)際上并無(wú)好處，還會(huì)增加背景，因此不主張反應(yīng)過(guò)夜，除某些特殊情況外。
4) 以10000g，4℃離心15s，收集微球。用裂解緩沖液清洗免疫復(fù)合物3次。裂解產(chǎn)物和洗滌緩沖液很容易通過(guò)抽吸法除去。
