 |
南京科佰生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： atcc代理,ATCC細(xì)胞系,ATCC細(xì)胞株,ATCC細(xì)胞庫(kù)購(gòu)買 |
會(huì)員.png)
11
聯(lián)系電話
|
南京科佰生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： atcc代理,ATCC細(xì)胞系,ATCC細(xì)胞株,ATCC細(xì)胞庫(kù)購(gòu)買 |
聯(lián)系電話
2016-7-20 閱讀(2918)
基本原理
細(xì)胞培養(yǎng)(Cell culture)是模擬機(jī)體內(nèi)生理?xiàng)l件，將細(xì)胞從機(jī)體中取出，在人工條件下使其生存、生長(zhǎng)、繁殖和傳代，進(jìn)行細(xì)胞生命過(guò)程、細(xì)胞癌變、細(xì)胞工程等問(wèn)題的研究。近年來(lái)，廣泛地應(yīng)用于分子生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、細(xì)胞工程等領(lǐng)域，發(fā)展成一種重要生物技術(shù)，并取得顯著成就。由體內(nèi)直接取出組織或細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)叫原代培養(yǎng)。
體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞或細(xì)胞株要在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代，以便獲得穩(wěn)定的細(xì)胞株或得到大量的同種細(xì)胞，并維持細(xì)胞種的延續(xù)。培養(yǎng)的細(xì)胞形成單層匯合以后，由于密度過(guò)大生存空間不足而引起營(yíng)養(yǎng)枯竭，將培養(yǎng)的細(xì)胞分散，從容器中取出，以1:2或l:3以上的比率轉(zhuǎn)移到另外的容器中進(jìn)行培養(yǎng)，即為傳代培養(yǎng)。
試劑和設(shè)備
細(xì)胞懸浮液；
6孔平底組織培養(yǎng)板，或φ60 mm培養(yǎng)皿；
18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的蓋玻片；
含血清培養(yǎng)基（通常為 RMPI 1640,含10% 小牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素）；
超凈工作臺(tái)；
CO2孵箱；
蓋片鑷；
操作步驟
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；
4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
注意事項(xiàng)
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；
4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；
5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
更多內(nèi)容分享請(qǐng)關(guān)注我們*哦
