Pfeiffer于十九世紀(jì)首先提出“內(nèi)毒素”一詞，研究表明，內(nèi)毒素在機(jī)體內(nèi)作用于單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生多種細(xì)胞因子（腫瘤壞死因子TNF，白細(xì)胞介素IL，干擾素Interferon，凝血素等）。當(dāng)這些因子在機(jī)體內(nèi)過量時(shí)，則可導(dǎo)致機(jī)體出現(xiàn)發(fā)熱、低血壓、休克、多器官功能衰竭甚至死亡。

因此，人和動物的注射藥物、生物制品和醫(yī)療器械的終端產(chǎn)品中的內(nèi)毒素的檢測和去除顯得尤為重要。

內(nèi)毒素結(jié)構(gòu)

內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的一部分，其主要成分為脂多糖（LPS），經(jīng)細(xì)菌細(xì)胞裂解后釋放出來。LPS可以分為三個(gè)不同的結(jié)構(gòu)域：特異性O(shè)鏈、核心寡聚糖和類脂A，如下圖所示：

內(nèi)毒素特性

性質(zhì)穩(wěn)定：160℃的溫度下加熱2-4個(gè)小時(shí)，或用強(qiáng)堿、強(qiáng)酸或強(qiáng)氧化劑加熱煮沸30分鐘才能破壞它的生物活性。
經(jīng)甲醛溶液處理后，可降低其毒性，但不能成為類毒素。
中國藥典（CP）規(guī)定，藥品、生物制品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）一般按以下公式確定：
L=K/M
式中L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，以EU/ml、EU/mg或EU/U（活性單位）表示；
K為人每公斤體重每小時(shí)大可接受的內(nèi)毒素劑量，以EU/(kg• h)表示，注射劑K=5 EU/(kg• h)，放射性藥品注射劑K=2.5 EU/(kg• h)，鞘內(nèi)用注射劑K=0.2 EU/(kg• h)；
M為人用每公斤體重每小時(shí)大劑量，以ml (kg• h)、mg(kg• h)或U/(kg• h)表示，人均體重按60 kg計(jì)算，人體表面積按1.62 m2計(jì)算，注射時(shí)間若不足1小時(shí)，按1小時(shí)計(jì)算。
按人用劑量計(jì)算限值時(shí)，如遇特殊情況，可根據(jù)生產(chǎn)和臨床用藥實(shí)際情況做必要調(diào)整，但需說明理由。

美國藥典（USP）規(guī)定，非經(jīng)腸道藥品的內(nèi)毒素限值，以劑量定義，等于：K/M。
除了鞘內(nèi)給藥以外的任何給藥途徑，K均為5 USP-EU/kg，鞘內(nèi)給藥時(shí)，K為0.2 USP-EU/kg，對于非鞘內(nèi)給藥放射性藥品，內(nèi)毒素限值的計(jì)算為175/V，V為以ml為單位的大推薦劑量，對于鞘內(nèi)給藥的放射性藥品，其內(nèi)毒素限值為14/V，對于按以每平方體表面積計(jì)算的給藥劑量（通常是抗腫瘤藥品），計(jì)算公式為K/M，其中K=5 EU/kg，M為(大劑量/m2/小時(shí)×1.80m2)/70kg。
檢測方法的建立：
1968年，由Leivin和Bang發(fā)現(xiàn)并建立了利用鱟試劑檢測細(xì)菌內(nèi)毒素的方法。他們發(fā)現(xiàn)，當(dāng)遇到內(nèi)毒素時(shí)，鱟的血液能夠凝結(jié)成塊。用鱟血液中的變形細(xì)胞提取物與待檢樣品混合，如果待檢樣品中含有內(nèi)毒素，則會觀察到上述情況。鱟試驗(yàn)法（LT）已經(jīng)替代了熱原檢查家兔法檢驗(yàn)藥品中的內(nèi)毒素。
目前FDA已經(jīng)批準(zhǔn)了以下LAL檢測法：凝膠法（ToxinSensorTM凝膠法內(nèi)毒素檢測試劑盒）、濁度法和顯色法（ToxinSensorTM顯色法LAL內(nèi)毒素檢測試劑盒）。
半定量測定——凝膠法
通過鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來半定量內(nèi)毒素的方法，是各國藥典細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的方法。
定量測定——濁度法和顯色法
濁度法（動態(tài)濁度法和終點(diǎn)濁度法）是通過鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化來測定內(nèi)毒素含量的方法。終點(diǎn)濁度法是基于細(xì)菌內(nèi)毒素濃度和反應(yīng)混合物的終點(diǎn)濁度( 吸收度或透光率) 之間的定量關(guān)系的一種檢測方法；動態(tài)濁度法（又稱動態(tài)比濁法）是檢測反應(yīng)混合物的濁度上升某一預(yù)先設(shè)定的吸光度所需要的反應(yīng)時(shí)間，或是檢測濁度增加速度的方法。
顯色法（動態(tài)顯色法和終點(diǎn)顯色法）是將鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)，可使特定底物顯色，通過釋放出的呈色團(tuán)的多少來測定內(nèi)毒素含量，又稱為比色法。終點(diǎn)顯色法是依據(jù)反應(yīng)混合物中內(nèi)毒素濃度和其在孵育終止時(shí)釋放出的呈色團(tuán)的量之間存在的量化關(guān)系來測定內(nèi)毒素含量的方法。動態(tài)顯色法是檢測反應(yīng)混合物的色度達(dá)到某一預(yù)先設(shè)定的吸光度所需要的反應(yīng)時(shí)間, 或檢測色度增長速度的方法。

內(nèi)毒素檢測方法的選擇：
凝膠法——僅需檢測樣品的內(nèi)毒素*。此法操作比較簡單、經(jīng)濟(jì)，不需要測定設(shè)備，可進(jìn)行定性或半定量測定。
顯色法（或濁度法）——定量測定樣品中內(nèi)毒素含量。
日常檢測量不大時(shí)，可以選擇終點(diǎn)顯色法，用普通的分光光度計(jì)就可完成實(shí)驗(yàn)。
檢測的樣品是生物制品、疫苗、血液制品等選用終點(diǎn)顯色法或動態(tài)顯色法。
檢測量比較大，檢測的樣品對鱟試劑的干擾不大，可選用動態(tài)濁度法鱟試劑。
注：動態(tài)濁度法與動態(tài)顯色法需要帶溫育系統(tǒng)的動態(tài)光度測定儀器及配套軟件。

華雅思創(chuàng)生物提供定量和定性產(chǎn)品如下：

凝膠定性：
LONZA 凝膠法鱟試劑檢測法：

品牌	產(chǎn)品描述	貨號	靈敏度EU/mL	包裝
LONZA	PYROGENT^TMPlus 凝膠法鱟試劑檢測（含對照），單管內(nèi)毒素對照品1x1mL24次，單管	N289-06	0.06	24次
		N289-125	0.125
		N289-25	0.25
LONZA	PYROGENTTM Ultra 凝膠法鱟試劑檢測（含對照）內(nèi)毒素對照品5x5mL 200次=4X50次/管	N594-03	0.03	200次
		N594-06	0.06
		N594-125	0.125

顯色法或濁度定量法：

品牌	貨號	產(chǎn)品描述	靈敏度EU/mL	包裝
LONZA	N383	PYROGENTTM -5000動態(tài)濁度法檢測	0.01-100	100次
LONZA	N384	PYROGENTTM -5000動態(tài)濁度法檢測	0.01-100	200次
LONZA	50-650U	Kinetic-QCLTM 動態(tài)顯色法鱟試劑檢測	0.005-50	192次
LONZA	50-640	PyroGeneTM 重組因子C熒光法內(nèi)毒素檢測試劑	0.005-5	192

輔助試劑耗材：

品牌	貨號	產(chǎn)品描述	包裝
LONZA	N186	凝膠法內(nèi)毒素對照品（E.Coli Strain 055：B5)	5瓶
LONZA	E50-640	終點(diǎn)顯色法內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)對照品（Strain 0111：B4)	1瓶
LONZA	W50-640	無內(nèi)毒素水，靈敏度＜0.005 EU/mL	30mL
LONZA	W50-100		100mL
LONZA	W50-500		500mL
LONZA	N207	13X100mm無內(nèi)毒素玻璃稀釋管，箔紙包裝，無瓶蓋	50/包

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LONZA 內(nèi)毒素檢測試劑分類與選擇

內(nèi)毒素致病性

內(nèi)毒素結(jié)構(gòu)

內(nèi)毒素特性

檢測方法的建立：