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哪些因素會(huì)影響核酸提取
全自動(dòng)核酸提取儀可廣泛應(yīng)用于基因組學(xué)、疾控醫(yī)療、食品安全、法醫(yī)鑒定、輸血安全、畜牧業(yè)與分子學(xué)研究等領(lǐng)域，比如鼻咽拭子、唾液、全血、血清、環(huán)境樣本、分泌物、糞便、動(dòng)物組織、植物組織、細(xì)菌、真菌、病毒、質(zhì)粒等各種樣本的核酸提取，結(jié)果穩(wěn)定。
1.洗滌步驟：
洗滌對(duì)于整個(gè)提取步驟至關(guān)重要，關(guān)系到核酸的純度，核酸的純度直接影響下游 PCR應(yīng)用。磁棒的振蕩幅度和混合時(shí)間會(huì)影響洗滌效率。磁棒振蕩幅度太小或混合時(shí)間太短，有雜質(zhì)殘留在磁珠上會(huì)影響磁珠吸附核酸的能力。振蕩太劇烈或時(shí)間太長(zhǎng)，會(huì)丟失部分核酸或造成核酸的斷裂、降解，得率下降。
2.裂解步驟：
樣本裂解是核酸提取過(guò)程中很關(guān)鍵的一步，只有充分裂解了細(xì)胞或病原體，才能釋放里面的核酸。
磁珠結(jié)合效率決定了有多少核酸可以吸附到磁珠上，即洗脫核酸的上限。影響結(jié)合效率的因素有磁珠的吸附能力以及結(jié)合緩沖液的結(jié)合能力。
3.洗脫步驟：
洗脫步驟直接影響核酸得率，影響洗脫效率的因素有磁珠的干燥程度以及洗脫溫度和時(shí)間。磁珠未充分晾干，可能會(huì)有醇類等雜質(zhì)殘留，影響后續(xù) PCR 反應(yīng)；磁珠過(guò)分干燥，核酸可能會(huì)干結(jié)在磁珠上，導(dǎo)致洗脫效率下降。適當(dāng)提高洗脫溫度和時(shí)間，有利于核酸從磁珠上游離下來(lái)，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或溫度過(guò)高，核酸有可能會(huì)降解，需要把握其中的平衡。