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ELISA檢測中不同樣品應有不同的處理方法
閱讀：2172 發(fā)布時間：2015-10-9
在進行ELISA檢測試驗過程中，是否正確處理樣品是Elisa檢測的*步，也是zui重要的一步，一般來說，可用于ELISA檢測的樣本包括血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等等類型，那么這幾種不同類型的樣本在處理方法上都有什么不同呢？
1、對于血清的處理
血清是ELISA檢測中zui常見的一類樣本，處理方法也比較簡單只需用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標本，將試管或離心管室溫放置2小時或4℃過夜，使血清析出。在采血過程中應避免溶血，因為紅細胞裂解時會釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標記的ELISA檢測中會有非特異性的顯色，而導致檢測的不準確性。同時也應避免細菌污染，因為菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導致檢測的假陽性。
2、對于血漿的處理
對于血漿的處理我們需要用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標本，標本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。避免使用溶血或高血脂的標本。
3、對于細胞裂解液的處理
1）吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基，用胰酶消化細胞，加適量培養(yǎng)基將細胞從培養(yǎng)板上吹下來。懸浮細胞可省略。
2）收集細胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預冷的PBS潤洗3次。
3）加入適量的預冷PBS或細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞。通常6孔板一個孔的細胞量需要150~250μL PBS重懸。
4）將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融幾次，使細胞充分裂解。也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。
5） 4℃ 10000×g 離心10min，除去細胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。
4、對于組織勻漿液的處理方法
1）將組織樣本用PBS (0.01M, PH 7.4) 沖洗，洗去組織表面殘留的血液或雜質(zhì)。
2）將組織塊稱重，記錄后剪碎，碎塊應盡量小，便于勻漿得更充分。
3）將組織按一定的比例加入預冷的PBS（臨用前加入蛋白酶抑制劑）勻漿，勻漿時置于冰上或冰浴中。
4）吸取勻漿液到離心管，4℃ 5000×g 離心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復凍融。