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簡單介紹下細(xì)胞爬片的使用步驟
簡單介紹下細(xì)胞爬片的使用步驟
細(xì)胞爬片步驟
(1)儲(chǔ)存液：1:10稀釋液可以保存在4℃里，三個(gè)月內(nèi)仍然可以使用。稀釋、儲(chǔ)存和吸取多聚賴氨酸要使用塑料制品。
工作液：0.1%(w/v)PLL，用移液槍吸取0.3ml PLL＋3ml無菌去離子水，混勻放于10ml無菌塑料離心管中。封口模密封后4℃存放。
(2)無菌處理：PLL不可以高溫消毒，故應(yīng)過濾除菌分裝于無菌處理的細(xì)胞凍存管內(nèi)，1ml/管，封口模密封，4℃保存。另外，準(zhǔn)備無菌去離子水50ml。
細(xì)胞爬片方法與技巧
爬片的準(zhǔn)備：
1、爬片可用一般的蓋玻片，也可用爬片；
2、應(yīng)用蓋玻片，可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板、12孔板或24孔板；
3、將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再用三蒸水沖洗3遍（個(gè)人認(rèn)為主要目的是沖洗干凈就可以了），放在飯盒或者培養(yǎng)皿（一定是玻璃的哦，要不然就„„）中烘干后進(jìn)行高壓消毒。
培養(yǎng)板的準(zhǔn)備：
1、泡酸過夜
2、沖洗，烘干（1、2步驟與前大致相同）
3、放入超凈工作臺(tái)用紫外線照1～2小時(shí)就可以用了（在照之前可以將爬片一并放入，若細(xì)胞貼壁能力不強(qiáng)，可經(jīng)多聚賴氨酸浸片后放入。貼壁能力強(qiáng)的話，就可以省略了，進(jìn)行紫外線消毒）
注：此步自己的經(jīng)驗(yàn)是爬片可以先浸入消毒后的PBS內(nèi)，緊接著放入培養(yǎng)板內(nèi)。目的：
浸過PBS的爬片依靠表面的液體，可以用培養(yǎng)板孔底貼和緊密，以利于細(xì)胞長到爬片上。（自己剛開始做的時(shí)候，經(jīng)常就是細(xì)胞全都長在了爬片與培養(yǎng)板之間，爬片上細(xì)胞罕見。）
細(xì)胞爬片：
1、胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)
2、根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可
3、第二天即可進(jìn)行干預(yù)措施