本文參照2020版《中國藥典》四部通則《2341農(nóng)藥殘留量測定法》新增第五法《藥材及飲片（植物類）中禁用農(nóng)藥多殘留測定法》中的固相萃取法，使用乙腈對金銀花試樣進行均質(zhì)提取，經(jīng)鹽析和離心后，GC-MS/MS組化合物采用GCB/NH2柱凈化，LC-MS/MS組化合物采用HLB柱凈化，最后上機檢測。
本方法采用?？?/span>AH-50全自動均質(zhì)器進行批量提取，提取液經(jīng)MPE高通量真空平行濃縮儀進行濃縮，然后用Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀對提取液進行凈化，最后再用MPE高通量真空平行濃縮儀對洗脫液進行濃縮，實現(xiàn)了金銀花制備過程全流程自動化。在40μg/kg的加標水平下GC-MS/MS法中33種化合物的回收率在71.5-118.8%之間，RSD值小于10%；在20μg/kg的加標水平下LC-MS/MS法中30種化合物的回收率在72.1-120.5%之間，RSD值小于10%，滿足實驗要求。
儀器與耗材
1.儀器
?？?/span>AH-50全自動均質(zhì)器
睿科MPE高通量真空平行濃縮儀
?？?/span>Fotector Plus高通量全自動固相萃取儀
Agilent 1290+6470高效液相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀
Agilent 8890+7000D氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀
2.耗材
樣品制備
GC-MS/MS法
量取上述溶液 2mL至15mL上樣管中，以石墨化碳氨基復合固相萃取小柱（貨號：RC-204-13822）為凈化柱，先用10 mL乙腈-甲苯（3:1）活化小柱，棄去流出液，之后以1 mL/min的速度上樣，再用2×3 mL的乙腈-甲苯（3:1）清洗樣品瓶并過柱，最后用14 mL的乙腈-甲苯（3:1）洗脫，收集以上流出液，具體的固相萃取條件如圖3所示。用MPE將洗脫液濃縮至近干，用乙腈轉(zhuǎn)移并稀釋至2 mL，混勻。精確移取1 mL上述定容液，精密加入0.3 mL磷酸三苯酯內(nèi)標溶液，過0.22 μm濾膜后上氣相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。
圖1 Fotector Plus對金銀花中多農(nóng)殘的固相萃取條件
LC-MS/MS法
量取直接提取法制備的溶液3mL，通過HLB柱（貨號：RC-204-36476）凈化，收集全部流出液，混勻。精確移取1 mL上述凈化液，精密加入0.3 mL水后過0.22 μm濾膜，上高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜儀測定。
樣品測試
基質(zhì)加標回收實驗
在金銀花樣品中添加濃度為40μg/kg的33種農(nóng)藥（GC-MS/MS）和20μg/kg的30種農(nóng)藥（LC-MS/MS）進行加標回收驗證，使用上述樣品制備方法，最后分別經(jīng)GC-MS/MS和LC-MS/MS檢測，平均回收率和RSD結果，如下表所示：
表-1 GC-MS/MS法33種化合物的平均回收率和相對標準偏差(n=3)
表-2 LC-MS/MS法30種化合物的平均回收率和相對標準偏差(n=3)
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