樣本勻漿方式知多少，信帆生物為您解答！

勻漿的方式：手工勻漿，超聲破碎,裂解液裂解,反復(fù)凍融。

① 手工勻漿：在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測指標(biāo)的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，用移液器將細(xì)胞懸浮液移至玻璃勻漿管中（2ml玻璃勻漿管），將玻璃勻漿管置于冰水混合物中，手動勻漿3分鐘，然后取破碎好的細(xì)胞懸浮液進(jìn)行測定。

② 超聲破碎:

在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測指標(biāo)的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，在冰水浴條件下進(jìn)行如下操作:

a、用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎，也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀，用400安培，5秒/次，間隙10秒反復(fù)3～5次。

b、用超聲細(xì)胞破碎儀，300W功率，每次超聲3～5秒，間隔30秒，重復(fù)4～5次。

③ 裂解液裂解 

常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,這三種去垢劑的作用是不同的，或者說作用力量強(qiáng)弱不同。

1、SDS屬于離子型去垢劑，zui厲害，基本可以把細(xì)胞*破掉，DNA會釋放出來，裂解液變得很粘稠。

2、NP-40是很溫和的去垢劑，1%濃度的基本可以破壞掉胞膜，而對核膜破壞的作用弱，結(jié)合特定的buffer可以獲得胞漿蛋白。

3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間，偏向于NP40，也是常用的細(xì)胞裂解液成分之一，在保護(hù)蛋白活性方面有一定作用（SDS基本會使蛋白變性失活）。

去垢劑屬性只是一方面，buffer、配比、濃度、提取方法和材料處理也都是關(guān)鍵因素

由于很多裂解液都是蛋白變性劑,對酶活力的測定有一定的影響,一般不推薦用裂解液進(jìn)行裂解。

④ 反復(fù)凍融:

在細(xì)胞沉淀中加入一定量的PBS（PBS的加入量根據(jù)所測指標(biāo)的不同而有所改變，一般加入0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬個/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，放低溫冰箱中結(jié)冰，溶解，再結(jié)冰，再溶解，反復(fù)3次左右）。

由于反復(fù)凍融對酶活力影響較大,一般不推薦使用

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