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組織肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I活性比色法定量檢測
閱讀：936 發(fā)布時間：2015-4-7| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 55.5KB |
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主要用途
組織肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I（CARNITINE PALMITOYL-TRANSFERASE I）活性比色法定量檢測試劑是一種旨在通過肉堿和脂酰輔酶A以及特定抑制劑反應(yīng)系統(tǒng)中釋放出巰基輔酶A，使用Ellman試劑，產(chǎn)生黃色5-巰基-2-硝基苯甲酸產(chǎn)物吸光峰值的變化，即采用比色法來測定組織裂解樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種組織裂解懸液樣品（動物、人體等）肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I的特異活性檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
脂肪酸β氧化過程（β-oxidation）在動物組織的線粒體發(fā)生的脂肪酸代謝通路，可概括為活化、轉(zhuǎn)移、β氧化及后經(jīng)三羧酸循環(huán)被*氧化生成CO2和H2O，并釋放能量等四個階段。大于10個碳（C10）的活化型長鏈脂酰輔酶A是不能直接透過線粒體內(nèi)膜，需要借助肉堿（camitine），即L-3羥-4-*基銨丁酸，而被轉(zhuǎn)運入線粒體內(nèi)，在線粒體內(nèi)膜的外側(cè)及內(nèi)側(cè)分別有肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶（carnitine palmitoyl transferase；CPT；EC2.3.1.21）I和Ⅱ。位于內(nèi)膜外側(cè)的酶Ⅰ，促進(jìn)脂酰CoA轉(zhuǎn)化為脂酰肉堿，后者可借助線粒體內(nèi)膜上的轉(zhuǎn)位酶（或載體），轉(zhuǎn)運到內(nèi)膜內(nèi)側(cè)，然后，在酶Ⅱ催化下脂酰肉堿釋放肉堿到胞漿，留下脂酰CoA。由此位于胞漿的活化脂肪酸―脂酰CoA穿過線粒體內(nèi)膜進(jìn)入基質(zhì)而被氧化分解。肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶缺失癥導(dǎo)致機體無法代謝脂肪酸。基于肉堿和脂酰輔酶A在乙莫克舍（Etomoxir）或丙二酰輔酶A（malonyl CoA）存在與否的條件下，通過肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶的作用，產(chǎn)生脂酰肉堿，并釋放出巰基輔酶A（CoA-SH），與Ellman試劑5,5-二硫基-雙（2-硝基苯甲酸）[5,5’-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]反應(yīng)后，產(chǎn)生黃色的5-巰基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），通過其吸收峰值的變化（412nm波長），來定量分析丙二酰輔酶A敏感性肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶I的特異活性。肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶I反應(yīng)系統(tǒng)為：