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大鼠C反應(yīng)蛋白ELISA試劑盒步驟說(shuō)明書
閱讀：1126 發(fā)布時(shí)間：2013-8-23| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 3.1KB |
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大鼠C反應(yīng)蛋白ELISA試劑盒操作說(shuō)明書
檢測(cè)范圍：80μg/ L2400μg/ L 96determinations的
目的
此套件可用于測(cè)定CRP濃度Ratserum，cellculture物上清或其它相關(guān)生物液體
檢測(cè)原理
該試劑盒檢測(cè)樣本中RatCRP水平，用純化RatCRP抗體涂層微孔，使固相抗體，然后addCRP的井，CombinedCRP抗體，HRP標(biāo)記，成為抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)*洗滌后添加TMB底物溶液，在HRP酶催化TMB底物變成藍(lán)色，反應(yīng)終止通過(guò)加入的硫酸溶液和顏色的變化是用分光光度法在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量的。大鼠CRP的濃度的樣品中，然后由比較OD值樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
試劑盒提供的材料
1
洗的解決方案
20ML×1瓶
7
STOPP解決方案
6毫升×1瓶
2
酶標(biāo)試劑
6毫升×1瓶
8
標(biāo)準(zhǔn)（4800μg/ L）
0.5毫升×1瓶
3
Microelisa stripplate
12well×8strips
9
標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑
1.5毫升×1瓶
4
樣品稀釋液
6毫升×1瓶
10
指令
1
5
顯色溶液A
6毫升×1瓶
11
封板膜
2
6
顯色液B
6毫升×1瓶
12
密封袋
1
標(biāo)本要求
1。 ，盡快標(biāo)本采集后，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)，應(yīng)該是extractas實(shí)驗(yàn)后盡快提取。如果它不能，標(biāo)本可以保存在-20℃保存，避免反復(fù)凍融。
2。無(wú)法檢測(cè)的樣品含NaN3，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。
分析過(guò)程
1。稀釋和添加樣品：稀釋原始密度標(biāo)準(zhǔn)如下表所示：
2400μg/ L的
5標(biāo)準(zhǔn)
150μL原始密度標(biāo)準(zhǔn)+150微升標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑
1200μg/ L的
4標(biāo)準(zhǔn)
150μL5標(biāo)準(zhǔn)150μL標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑
600μg/ L的
3標(biāo)準(zhǔn)
150μL4標(biāo)準(zhǔn)150μL標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑
300μg/ L的
2標(biāo)準(zhǔn)
150μL+150微升3標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑
150微克/ L
1標(biāo)準(zhǔn)
150μL+150微升2標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑
2。加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）。測(cè)試樣本。加樣品稀釋液40μl的測(cè)試樣品，然后加入待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍），加樣井，不觸及孔壁盡可能輕輕地混合。
3。溫育：閉板后封板膜，在37℃孵育30分鐘。
配液：將30倍（或20倍）洗滌溶液稀釋30倍（或20倍），用蒸餾水和預(yù)定。
5.washing：揭掉封板膜，干discardLiquid，擺動(dòng)，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后排出，重復(fù)5次，拍干。
加酶，每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作3。
洗滌：操作5。
9。顏色：，每孔加入顯色溶液A的50ul的顯色溶液B，避光保存15分鐘，在37℃
反應(yīng)10.Stop的：加入終止液，每孔，停止反應(yīng)（黃色的藍(lán)色的顏色變化）。
11.assay：以空白零，讀加終止液后15分鐘內(nèi)，在450nm處的吸光度。
步驟說(shuō)明
標(biāo)準(zhǔn)，樣品稀釋液
AddStandard，樣品稀釋液，37℃孵育30分鐘。
洗5次，共軛AddHRP的試劑，在37℃孵育30分鐘。
洗5次，加入顯色解決方案A和B，孵育在37℃30分鐘。
AddStopp解決方案
15分鐘內(nèi)，在450nm處的吸光度
計(jì)算
計(jì)算
以水平的標(biāo)準(zhǔn)密度，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線在坐標(biāo)紙上，找出相應(yīng)的密度，根據(jù)樣品的OD值由采樣曲線，再乘以稀釋倍數(shù)，或計(jì)算直線標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程，與標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品的密度，乘以稀釋倍數(shù)，其結(jié)果是樣品的實(shí)際密度。
重要注意事項(xiàng)
1。該試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘，ELISA板涂如果還沒(méi)有使用后打開(kāi)，板應(yīng)裝入密封袋中保存。
2。洗滌緩沖液可能會(huì)有結(jié)晶析出，可被加熱的水，可以在稀的情況下溶解。洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3。加樣品采樣的每一步，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。在5分鐘內(nèi)添加樣品，如果樣品的數(shù)量多，推薦使用排。
4。如果待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本OD是大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*），請(qǐng)稀釋樣品（n倍），請(qǐng)乘以稀釋倍數(shù)diluenteand。（×N×5）。
5。封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6?；灞芄獗４?。
7。請(qǐng)嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀作為標(biāo)準(zhǔn)。
8。所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9。不要混用試劑與從其他地段。
儲(chǔ)存與有效期
不要將2-8℃。
2.validity：半年