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            技術文章

            細菌核糖體(ribosome)分離試劑盒說明書

            閱讀:1083          發(fā)布時間:2022-12-13


             

            細菌核糖體(ribosome)分離試劑盒產品說明書

             

            主要用途

             

            細菌核糖體ribosome分離試劑是一種旨在通過化學破膜以及差速超速離心處理方法,分離出完整而純化的70S核糖體組分的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適合于各種培養(yǎng)或臨床細菌菌株核糖體成分的分離。產品即到即用,操作簡易,性能穩(wěn)定,無核酶和蛋白酶污染,萃取純度和產量皆高。 

             

            技術背景

             

            核糖體(ribosome)是一種細小顆粒的核糖蛋白復合物(ribonucleoprotein complex),生命細胞制造蛋白質的非膜性結構元素和轉譯裝置(translational apparatus),由RNA和蛋白質組成,具有多肽轉移酶的活性,刺激RNA合成,并調節(jié)RNA、核糖體自身以及蛋白質的生物合成。其分成2個亞體:大亞體和小亞體。核糖體通過大亞體結合轉運核糖體(tRNA),而小亞體結合信使RNAmRNA),然后閱讀RNA提供的信息,轉譯(translation)成氨基酸,連接成蛋白分子。真核生物的核糖體位于胞漿(游離核糖體)、線粒體和葉綠體中。其中胞漿核糖體為80S核糖體,由40S小亞體和60S大亞體組成:60S5S RNA、28S RNA、5.8S亞基和49個蛋白組成;而40S18S RNA33個蛋白組成。線粒體和葉綠體核糖體與原核生物相似,為70S核糖體,由30S小亞體和50S大亞體組成:50S包括5S、23S RNA34個蛋白;30S包括16S RNA21個蛋白。細菌核糖體成為抗菌藥物的靶標,其中50%以上抗菌素針對細菌核糖體。同時核糖體高度進化保留,成為種系分類(phylogenetic classification)的分子標志。   

             

            產品內容

             

            裂解液(Reagent A           毫升

            保存液(Reagent B           毫升

            產品說明書              1份

             

            保存方式

             

            保存在-20℃冰箱里,有效保證6

             

            用戶自備

             

            50毫升錐形離心管:用于樣品操作的容器

            1.5毫升離心管:用于樣品操作和保存的容器

            臺式離心機:用于樣品操作

            超速離心機:用于樣品操作

            超聲儀:用于裂解細胞

            渦旋震蕩儀:用于混勻

             

             

            實驗步驟

             

            實驗開始前,將試劑盒里的試劑置于冰槽里凍融備用。然后進行下列操作。

             

            1. 準備50毫升細菌(OD600=0.2108細胞/毫升)

            2. 轉移到50毫升錐形離心管

            3. 臺式離心機離心30分鐘,速度為3000g

            4. 小心抽去上清液

            5. 加入預冷的xx毫升裂解液Reagent A

            6. 渦旋震蕩15秒,充分混勻

            7. 超聲處理100瓦功率,20秒一次重復4

            8. 置于冰槽里孵育30分鐘,期間每隔5分鐘渦旋震蕩15

            9. 放進4臺式離心機離心15分鐘,速度為15000g

            10. 小心移取上清液到新的高速離心管

            11. 放進超速離心機離心15分鐘,速度為30000g

            12. 小心移取上清液到新的高速離心管(注意:可以使用礦物油填滿離心管)

            13. 放進4超速離心機離心2小時,速度為100000g

            14. 小心取出離心管 

            15. 小心抽去上清液

            16. 加入500微升或xx毫升保存液(Reagent B,混勻顆粒群

            17. 轉移到新的1.5毫升離心管

            18. (選擇步驟)進行核糖體定量測定 

            19. 放進-70冰箱里保存或置于冰槽里準備后續(xù)操作

             

            注意事項

             

            1. 本產品為20次操作(5 X 109細胞/  

            2. 建議使用足夠的細

            3. 樣品操作均須在4或以下狀態(tài)下進行

            4. 操作時,須無菌操作,避免污染母液

            5. 核糖體定量計算公式(微克/微升): A260 ? 11.1

            6. 如果進行核糖體蛋白萃取,建議使用純化核糖體蛋白質萃取試劑盒HL16041

            7. 本公司提供系列核糖體分析技術產品

             

            質量標準

             

            1. 本產品經鑒定性能穩(wěn)定

            2. 本產品經鑒定分離的核糖體維持正常活性

            3. 本產品經鑒定不含污染性蛋白酶和核酶


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