抗壞血酸含量測(cè)定試劑盒說明書

注意：正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

規(guī)格：100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體120ml×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體6ml×1 瓶，4℃保存； 試劑二：液體5ml×1 瓶，4℃保存； 試劑三：液體6ml×1 瓶，4℃保存；

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑10mg×1 瓶（避光），4℃保存。（稱取1mg加入10ml提取液，即為100μg/ml標(biāo)準(zhǔn)品）

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

研缽、冰、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1ml玻璃比色皿、可調(diào)式移液器和蒸餾水。

產(chǎn)品說明：

AsA 。AsA 是輔酶、自由基清除劑、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底物等。作為植物細(xì)胞中最重要的抗氧化劑，AsA 在保護(hù)葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用， 也是衡量農(nóng)作物產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。

抗壞血酸具有較強(qiáng)還原能力將Fe3+還原成Fe2+，鄰二氮菲與Fe2+會(huì)形成紅色螯合物，在534nm處具

有強(qiáng)的吸收法，且吸光值與反應(yīng)液中抗壞血酸含量呈正比。

操作步驟：

一、樣品的前處理：

(1) 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測(cè)。

(2) 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（10個(gè)）：提取液體積（ul）為500~1000：1 的比例（建議500 萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；8000g，4℃離心 20min，取上清液置冰上混勻待測(cè)。

(3) 血清等液體：按照樣本體積（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1ml 樣本，加入1ml提取液）進(jìn)行混勻。8000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測(cè)。

二、測(cè)定操作表：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 534nm，提取液調(diào)零。

2. 測(cè)定前將所有試劑 37℃（哺乳動(dòng)物）或 25℃（其它物種）水浴 5min 以上。

3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及樣本測(cè)定（按順序加入下列試劑）

 

 

 

充分混勻，室溫靜置 15min 后，534nm 處測(cè)定各管吸光值。如底部有沉淀，離心后再讀數(shù)三、抗壞血酸含量計(jì)算

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品△A 帶入公式中（x），計(jì)算出樣品濃度 y（μg/mL）。1.按蛋白濃度計(jì)算

抗壞血酸（μg / mg prot）=y×V 樣÷（V 樣×Cpr） 2.按樣本鮮重計(jì)算

抗壞血酸（μg /g 鮮重）= y×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W) 3.按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

抗壞血酸（μg /106cell）= y×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量) 4.按體積計(jì)算

抗壞血酸（μg /ml）=10y

V 樣總：上清液總體積，mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；細(xì)胞數(shù)量：以 106 為單位計(jì)量；T：樣本稀釋倍數(shù)。

注意事項(xiàng)：

1、樣品處理需勻漿*，抗壞血酸易分解，需避光保存

2、標(biāo)準(zhǔn)品：現(xiàn)配現(xiàn)用。

3、若不確定樣品中 抗壞血酸 含量的高低，可稀釋幾個(gè)梯度后再進(jìn)行測(cè)量。

4、因?yàn)樘崛∫褐泻械鞍踪|(zhì)沉淀劑，因此上清液不能用于蛋白濃度測(cè)定。