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超氧化物歧化酶試劑盒的檢測意義
閱讀：1440 發(fā)布時間：2020-2-20超氧化物歧化酶試劑盒
測定意義：
SOD（EC 1.15.1.1）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，催化超氧化物陰離子 發(fā)生岐化作用，生成 H2O2 和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶，也是 H2O2 主要生成 酶，在生物抗氧化系統(tǒng)中具有重要作用。
測定原理：
通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應(yīng)系統(tǒng)產(chǎn)生超氧陰離子(O2-.)，O2-.可還原氮藍四唑生成藍色甲臜，后者在 560nm 處有吸收；SOD 可清除 O2-.，從而抑制了甲臜的形成；反應(yīng)液藍色越深， 說明 SOD 活性愈低，反之活性越高。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制：
提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：15mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存，用時加入27ml蒸餾水，充分搖勻懸濁液；
試劑三：液體 175μL×1 支，4℃保存；(與蒸餾水1：1稀釋后再使用)
試劑四：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
粗酶液提取：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備： 細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。