化工儀器網(wǎng)技術(shù)文章
高靈敏ELISA試劑盒操作步驟中的忌諱
閱讀：1406 發(fā)布時間：2018-1-26ELISA試劑盒實驗中每一個步驟都尤為重要，細(xì)節(jié)不容忽視，它是實驗成功的關(guān)鍵與否；在這
里本司為方便各位了解，更好的完成實驗，特對高靈敏ELISA試劑盒操作步驟中的忌諱做出以
下分析，供大家參考：
1、吸取液體時速度不易太快，以免產(chǎn)生氣泡，吸取的量不夠準(zhǔn)確。
2、手工洗板時每次加入洗滌液后。應(yīng)靜置15～30s，不要將一個酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一
酶標(biāo)孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干。
3、底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性，應(yīng)盡量避免接觸皮
膚。
4、加樣后及時放人孵箱，標(biāo)本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間，防止孵育
時間人為延長，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。
5、作時必須戴手套，穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。
6、剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分
鐘后廢棄。
7、同批號試劑組分不得混用。
8、洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
9、每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是后加底物溶液及2N H2SO4。
測量時先用此孔調(diào)OD值至零。
10、要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性，可以使用蒸餾水和電子天平進行確定(由于蒸餾水不含雜質(zhì)
，溫度環(huán)境為20%左右時，lmL的水可以看作是lg、200 L的水可以看作是0.2g)每一把微量加樣
器都應(yīng)該將其高量程和低量程進行確定。
11、在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
12、檢驗技師應(yīng)具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗。能熟練操作實驗儀器、器械，具
有一定總結(jié)和分析問題的能力，對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決。
13、操作前仔細(xì)閱讀說明書，嚴(yán)格按照說明書要求進行規(guī)范化操作。不同批號的試劑不可混用
。值得改進的地方，反復(fù)試驗確定成立后才能改進，比如洗板次數(shù)的掌握等。
14、評估試劑的實用性，試劑的穩(wěn)定與否，對準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前，應(yīng)進行
陰、陽對照及樣品反復(fù)比照試驗，判定試劑符合要求后方可使用。
15、加樣要準(zhǔn)確、快速。加樣不準(zhǔn)確，酶生成物的量不能確定，直接影響顯色結(jié)果。另外，顯
色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān)，所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時間內(nèi)加
樣完畢的實驗，如果加樣遲緩，便出現(xiàn)誤差，而且試劑長時間暴露在外，尤其室溫過高時，保
存期會縮短甚至失效。
16、使用校對過的微量移液器，排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要
17、嚴(yán)格掌握顯色時間，顯色時間過短，加入終止液反應(yīng)終止后，底物結(jié)合物的量過少，易出
現(xiàn)假陰性。超過顯色要求時間后顯色，應(yīng)判為假陽性，這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立
即顯色，不可報陽性，這可能是本底顯色的結(jié)果。
18、洗滌*，洗板不*，酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性。另外，洗滌液要新鮮，現(xiàn)用現(xiàn)
配，陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象，也可能出現(xiàn)假陽性。
19、嚴(yán)控反應(yīng)時間，反應(yīng)時間過長，酶失活；反應(yīng)時間過短，酶結(jié)合物不能與血清中的微生物
抗原抗體充分結(jié)合，生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固，容易洗掉，都可能造成假陰性。
20、ELISA檢測操作步驟復(fù)雜，可強各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制，才能得到準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果。
愿以上這些能對您有所幫助，如果您還有什么疑問，我司咨詢。