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了解細(xì)胞培養(yǎng)基的方法
閱讀:63 發(fā)布時(shí)間:2014-9-15 了解細(xì)胞培養(yǎng)基的方法影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素很多,讓我們先從培養(yǎng)基和血清說(shuō)起。以前大部門(mén)實(shí)驗(yàn)室都是用干粉培養(yǎng)基,但配制過(guò)程就較為繁瑣,要溶解、調(diào)pH值,過(guò)濾,過(guò)程中可能會(huì)產(chǎn)生一些濃度誤差,而且有些實(shí)驗(yàn)室的水質(zhì)并不理想,所以培養(yǎng)的效果會(huì)有差異。經(jīng)典的培養(yǎng)基有良多種,Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。了解細(xì)胞培養(yǎng)基的方法由于試劑、水、不同批號(hào)的血清之間都存在著差異。別小看細(xì)胞培養(yǎng),這里可蘊(yùn)含著大學(xué)問(wèn)。選擇你感愛(ài)好的細(xì)胞類(lèi)型,它就會(huì)彈出推薦的培養(yǎng)基、血清和轉(zhuǎn)染試劑等,有時(shí)還有優(yōu)化好的轉(zhuǎn)染步驟,很方便。
假如你是著手建立一種全新細(xì)胞的培養(yǎng)體系,根本找不到任何參考,那你就得花點(diǎn)時(shí)間自己試驗(yàn)了。要進(jìn)步培養(yǎng)基的不亂性,可以從培養(yǎng)基和血清兩方面入手。假如使用液體培養(yǎng)基,這種人為的誤差會(huì)減少,由于究竟是大批量產(chǎn)業(yè)化出產(chǎn)的,批間差會(huì)很小。了解細(xì)胞培養(yǎng)基的方法細(xì)胞培養(yǎng)是實(shí)驗(yàn)室里zui常見(jiàn)和zui基本的實(shí)驗(yàn)了,但卻不是zui簡(jiǎn)樸的。有時(shí)候細(xì)胞狀態(tài)不好,轉(zhuǎn)染、藥篩這些實(shí)驗(yàn)根本就沒(méi)辦法做??傊琈EM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI 1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)是一個(gè)好的開(kāi)始。 Sigma上也有一個(gè)Media Expert,包括了培養(yǎng)基所有成分的功能描述、使用推介和參考文獻(xiàn)等,它仍是一個(gè)解決能手,對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)中的常見(jiàn)題目,如細(xì)胞貼壁不好、培養(yǎng)基變色等,它都會(huì)列出可能的原因,并提供補(bǔ)救辦法。 HyClone和Invitrogen都在海內(nèi)建立了液體培養(yǎng)基的出產(chǎn)基地,出產(chǎn)和運(yùn)輸本錢(qián)大幅降低,所以現(xiàn)在的價(jià)格也只是50-60元/500ml,比干粉培養(yǎng)基貴不了多少,而且還幫你省了過(guò)濾器和時(shí)間。大家是不是感覺(jué)液體培養(yǎng)基會(huì)貴很多,以前是這樣,但現(xiàn)在非也。有時(shí)候你會(huì)驚奇地發(fā)現(xiàn)你的*培養(yǎng)前提與文獻(xiàn)報(bào)道的不同,就算是統(tǒng)一種培養(yǎng)前提,細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)也時(shí)好時(shí)壞,這是很正常的。你也可以購(gòu)買(mǎi)幾種培養(yǎng)基來(lái),然后花大約兩周的時(shí)間做一個(gè)簡(jiǎn)樸的細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn),來(lái)選擇其中的。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用zui廣泛的培養(yǎng)基?;蛘哒业较嚓P(guān)的文獻(xiàn),作為參考。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞,很可能在DMEM或M199中同樣很輕易生長(zhǎng)。