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撫生試劑-ELISA法檢測白細胞介素-4
閱讀：183 發(fā)布時間：2014-6-6ELISA法檢測白細胞介素-4
白細胞介素-4(1L-4)是Th2細胞分泌的一類重要細胞因子，可促進巨噬細胞的黏附，介導(dǎo)IgE的產(chǎn)生，在局部炎性細胞浸潤中發(fā)揮作用，同時IL-4可使IgE受體表達增強，誘導(dǎo)嗜酸細胞聚集和遷移。
[檢測方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 在微孔反應(yīng)板上包被抗人IL-4單克隆抗體，待測標本和標準品中的IL-4會與抗人IL-4單克隆抗體結(jié)合，游離的成分被洗去，同時加入生物素化的抗人IL-4抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。生物素與親和素特異結(jié)合，抗人IL-4抗體與結(jié)合在單克隆抗體上的人IL-4結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色劑，若反應(yīng)孑L中有IL-4，HRP會使五色的顯色劑呈現(xiàn)藍色，加終止液變黃色。在波長450nm處測吸光度，IL-4濃度與吸光度成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中的IL-4濃度。
[標本準備] 靜脈血2ml，不抗凝。
[試劑]
1．預(yù)包被微孔反應(yīng)板
2．濃縮酶結(jié)合物
3．酶結(jié)合物稀釋液
4．標準晶和標本稀釋液
5．濃縮生物素化抗體
6．IL-4標準品
7．濃縮洗滌液
8．顯色劑A、B
9．終止液
[儀器] 酶標儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀。
[檢測步驟]
1．在微孔反應(yīng)板相應(yīng)孔中分別加入待測樣本、不同濃度標準品100ul，再加生物素化抗體．工作液50ul。
2．振蕩混勻，置20～25℃環(huán)境中溫育120min。
3．將孔內(nèi)液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。
4．除空白孔外，加入酶結(jié)合物工作液100ul。
5．振蕩混勻，置20～25℃環(huán)境中溫育30min。
6．將孔內(nèi)液體吸干，用洗滌液充分洗滌5次，干燥。
7．每孔加入顯色劑A、B各50fA，輕輕振蕩混勻，37℃環(huán)境中避光顯色10min。
8．加入終止液50tA后，輕輕振蕩混勻。用酶標儀(450nm波長)測定各孔吸光度，與標準曲線對照，求出IL-4水平。
[正常參考值] 務(wù)實驗室可根據(jù)檢測方法的不同確立正常參考值范圍。
[注意事項]
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)在室溫環(huán)境中平衡30min后方可使用，未用完的微孔條用自封袋密封保存。
2．酶標板洗滌時各孔均需加滿洗滌液，防止孔內(nèi)有游離酶不能洗凈。應(yīng)設(shè)定30—60s的洗滌浸泡時間。
3．滴加試劑前應(yīng)將滴瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體混勻。滴加時瓶身應(yīng)保持垂直，以使滴量準確(注意：勿將試劑滴在孔壁上)。
4．所有樣品和廢棄物都應(yīng)按傳染源處理。終止液為2mol／L硫酸，使用時應(yīng)注意安全。
5．每批樣本應(yīng)同時做標準曲線。
6．若標本OD值在標準曲線測定范圍以外，應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測。