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            大鼠ELISA試劑盒樣品制備方法

            閱讀:276          發(fā)布時間:2020-8-3

             

            一、細胞培養(yǎng)物上清液

            1.將細胞培養(yǎng)上清移至離心管,4℃,1,500 rpm 離心 10 分鐘。

             2.立即進行上清液的分裝并于 -80℃ 保存。避免反復(fù)凍融。

             二、細胞提取物

            1.將細胞培養(yǎng)板放置在冰上。

            2.吸出培養(yǎng)基并用預(yù)冷 PBS 輕輕漂洗細胞一次。

            3.棄去 PBS ,向 100 mm 培養(yǎng)板加入 0.5ml 提取緩沖液。

            4.收集細胞,然后移至經(jīng)過預(yù)冷的離心管中。

            5.短暫渦旋后冰上孵育 15-30 分鐘

            6.4℃ 13,000  rpm 離心 10 分鐘,沉淀不溶性內(nèi)容物。

            7.將上清(這里是指可溶性細胞提取物)分裝至預(yù)冷的離心管中,并于 -80℃ 保存。盡可能減少反復(fù)凍融次數(shù)。

            三、條件培養(yǎng)基

            1.將細胞接種到含*(含血清)生長培養(yǎng)基的培養(yǎng)容器中,使細胞增殖達到預(yù)期的融合度。

            2.棄去培養(yǎng)基,用預(yù)溫 PBS 小心洗滌。重復(fù)洗滌步驟。

            3.棄去 PBS 洗滌液并小心加入無血清培養(yǎng)基。

            4.孵育 1-2 天。

            5.將培養(yǎng)基移至離心管,4℃ 1,500 rpm 離心 10 分鐘。

            6.立即分裝上清并于 -80℃ 保存。避免反復(fù)凍融。

             

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