cytoskeleton BK037說明書

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Cytoskeleton，Inc。很高興為藥物篩選，信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞骨架研究提供廣泛的試劑盒和產(chǎn)品。我們專注于生產(chǎn)純化蛋白質(zhì)和易于使用的試劑盒，以研究生物化學(xué)和細(xì)胞過程。我們的試劑盒可用于少量樣品，用于基礎(chǔ)研究或小屏幕（Biochem Kits™），也可用于大屏幕的高通量樣品（CytoDYNAMIX Screens™）。

除了我們現(xiàn)有的產(chǎn)品，我們還在產(chǎn)品線中為微管，微管蛋白，運動蛋白，小G蛋白效應(yīng)物，GAP，GEF和其他幾種蛋白提供藥物篩選服務(wù)。

Cytoskeleton的Biochem Kits™是用于分析細(xì)胞骨架生物化學(xué)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的不同方面的綜合試劑盒。這些工具包通常構(gòu)成出版物中圖形的基礎(chǔ)，請查看引文標(biāo)簽中的示例。該試劑盒附帶了分析所需的所有試劑以及如何使用它們的詳細(xì)說明，因此您可以在準(zhǔn)備好試劑盒后立即進行分析！

測量蛋白質(zhì)和藥物對肌動蛋白聚合/解聚的影響。
發(fā)現(xiàn)和表征肌動蛋白結(jié)合蛋白（ABPs）。
在細(xì)胞或組織裂解物中定量G-肌動蛋白（單體）對F-肌動蛋白（聚合物）。
將設(shè)置時間從幾個月縮短到幾天。

許多出版物引用了在論文的材料和方法部分中使用Cytoskeleton的試劑盒。通常，引文與圖形或圖像形式的特定結(jié)果相關(guān)聯(lián)，這有助于您，作者，您的發(fā)現(xiàn)。這表明套件可在短時間內(nèi)生成出版物質(zhì)量數(shù)據(jù)，從而有助于提高工作效率。肌動蛋白試劑盒的引用示例如下所示。個別產(chǎn)品頁面上提供了更多引文。??

肌動蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒：兔骨骼肌肌動蛋白（Cat。＃BK001）

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肌動蛋白聚合生物化學(xué)試劑盒（熒光形式）：兔骨骼肌肌動蛋白（Cat。＃BK003）

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肌動蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒：人血小板肌動蛋白（Cat。＃BK013）

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G-Actin / F-actin體內(nèi)檢測Biochem試劑盒（目錄號BK037）

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問題1：哪種試劑盒是檢測肌動蛋白結(jié)合蛋白的*選擇？

答案1： Cytoskeleton有兩個肌動蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析試劑盒，是識別和表征肌動蛋白結(jié)合蛋白的理想選擇。一個試劑盒使用肌肉肌動蛋白（Cat。＃BK001），另一個試劑盒使用非肌肉肌動蛋白（Cat。＃BK013）。兩種測定均利用共沉淀來鑒定蛋白質(zhì)是否與單體或絲狀肌動蛋白結(jié)合以及蛋白質(zhì)是否具有F-肌動蛋白切斷或成束特性。為了檢查與肌動蛋白單體結(jié)合的化合物或蛋白質(zhì)，含有鏈霉抗生物素蛋白包被的孔的96孔板可以與生物素化肌動蛋白復(fù)合（Cat。＃AB07）產(chǎn)生肌動蛋白單體捕獲蛋白。然后可以將化合物，蛋白質(zhì)或提取物與捕獲蛋白一起溫育，并且可以通過HRP檢測系統(tǒng)使用針對目標(biāo)化合物或蛋白質(zhì)的抗體（或標(biāo)記可以與測試蛋白綴合）來顯現(xiàn)結(jié)合。請記住，緩沖液組成也很重要，因為它需要低鹽（約50 mM）并含有CaCl 2（或其他二價陽離子）和ATP以維持肌動蛋白單體的穩(wěn)定性。有關(guān)兼容緩沖液的示例，請參閱我們的一般肌動蛋白緩沖液配方（Cat。＃BSA01-001）?；蛘撸梢杂肎ST標(biāo)記感興趣的蛋白質(zhì)（避免還原劑）并與板綴合，然后與生物素化的肌動蛋白一起溫育，并用HRP綴合的鏈霉抗生物素蛋白顯現(xiàn)。

問題2：當(dāng)我對感興趣的肌動蛋白沒有可用的芘結(jié)合物（例如心臟，平滑肌或細(xì)胞質(zhì)肌動蛋白）時，如何用芘測定法測量肌動蛋白聚合？

答案2： 為了檢查未標(biāo)記肌動蛋白的聚合，請點擊此處查看使用過量未標(biāo)記肌動蛋白（心肌，平滑肌或細(xì)胞質(zhì)）加10％芘標(biāo)記肌肉肌動蛋白的聚合方案。芘肌肉肌動蛋白不會以該測定中使用的濃度自身聚合，因此反應(yīng)依賴于未標(biāo)記的非肌肉肌動蛋白形成F-肌動蛋白。以這種方式，芘標(biāo)記的肌肉肌動蛋白被吸收并聚合以充當(dāng)用于聚合未標(biāo)記的肌動蛋白的報道分子，其以更高的濃度存在。

問題3：如何從細(xì)胞或組織提取物中測量G-和F-肌動蛋白？

答案3： 確定細(xì)胞或組織樣本中游離球狀肌動蛋白（G-肌動蛋白）含量與絲狀肌動蛋白（F-肌動蛋白）含量的可重復(fù)和準(zhǔn)確的方法是使用F-肌動蛋白和G-肌動蛋白部分的Western印跡定量。。一般方法是使F-肌動蛋白穩(wěn)定緩沖液中的細(xì)胞或組織均質(zhì)化，然后高速離心以將F-肌動蛋白與G-肌動蛋白池分離。然后通過SDS-PAGE分離級分，并通過Western印跡定量肌動蛋白。終結(jié)果給出了準(zhǔn)確的方法來確定摻入細(xì)胞骨架的F-肌動蛋白與細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的G-肌動蛋白的比例。細(xì)胞骨架提供了一種簡單易用的選擇，可用G-肌動蛋白/ F-肌動蛋白體內(nèi)檢測試劑盒（Cat。＃BK037）定量G-和F-肌動蛋白。該試劑盒提供了在不同處理條件下定量細(xì)胞或組織樣品中單體和聚合肌動蛋白水平的所有必需試劑。將樣品離心，然后將沉淀（F-肌動蛋白）和上清液（G-肌動蛋白）溶解于SDS上樣緩沖液中并通過Western印跡處理。

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肌動蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒：人血小板肌動蛋白

BK013

肌動蛋白結(jié)合蛋白旋轉(zhuǎn)分析Biochem試劑盒：兔骨骼肌肌動蛋白

BK001

肌動蛋白聚合生物化學(xué)試劑盒（熒光形式）：兔骨骼肌肌動蛋白

BK003

F-actin Visualization Biochem Kit（熒光格式）

BK005

G-Actin / F-actin In Vivo Assay Biochem Kit

BK037

G-Actin/F-actin In Vivo Assay Biochem Kit

30-100 assays (Cat. # BK037)

窗體底端

產(chǎn)品用途包括

研究藥物化合物對G-肌動蛋白與F-肌動蛋白比例的影響。
研究突變細(xì)胞系與其親本細(xì)胞系對G-肌動蛋白與F-肌動蛋白比例變化的影響。
研究環(huán)境物理改變對G-肌動蛋白與F-肌動蛋白比例的影響。

引言
確定細(xì)胞群中絲狀肌動蛋白（F-肌動蛋白）含量與游離球狀肌動蛋白（G-肌動蛋白）含量的可重復(fù)和準(zhǔn)確的方法是使用F-actin和G-actin細(xì)胞的Western印跡定量分?jǐn)?shù)（1-4）。一般方法是使F-肌動蛋白穩(wěn)定緩沖液中的細(xì)胞均質(zhì)化，然后離心以將F-肌動蛋白與G-肌動蛋白池分離。然后通過SDS-PAGE分離級分，并通過Western印跡定量肌動蛋白。終結(jié)果給出了準(zhǔn)確的方法來確定摻入細(xì)胞骨架的F-肌動蛋白與細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn)的G-肌動蛋白的比例。該試劑盒包含進行該試驗所需的所有試劑。

試劑盒內(nèi)容
該試劑盒包含足夠的材料，可根據(jù)分析設(shè)置進行30-100次分析，并包含陽性和陰性對照試劑。包括以下組件：

裂解和F-肌動蛋白穩(wěn)定緩沖液
ATP（Cat。＃BSA04）
蛋白酶抑制劑雞尾酒（Cat。＃PIC02）
F-肌動蛋白增強對照溶液
F-肌動蛋白解聚對照溶液
控制G-actin標(biāo)準(zhǔn)品（目錄號＃AKL99）
肌動蛋白多克隆抗體（Cat。＃AAN01）
SDS樣品緩沖液（5 x）
DMSO
手冊詳細(xì)的協(xié)議和廣泛的故障排除指南

需要的設(shè)備

離心機能夠以100,000xg的溫度控制操作，體積為100μl至2ml，取決于細(xì)胞裂解體積
SDS-PAGE小凝膠系統(tǒng)和western印跡轉(zhuǎn)移裝置

實施例結(jié)果
使用G-肌動蛋白/ F-肌動蛋白體內(nèi)測定試劑盒，在用肌動蛋白聚合藥物jasplakinolide處理的Swiss 3T3細(xì)胞中研究了G-肌動蛋白和F-肌動蛋白量的變化。在未經(jīng)處理的瑞士3T3細(xì)胞中，80％的肌動蛋白是可溶性G-肌動蛋白，并且在上清液部分中發(fā)現(xiàn)，20％的肌動蛋白是絲狀F-肌動蛋白并且在沉淀部分中發(fā)現(xiàn)。在用jasplakinolide處理的Swiss 3T3細(xì)胞中，80％的肌動蛋白重組成F-肌動蛋白并且在沉淀部分中發(fā)現(xiàn)（圖1）。

圖1.用jasplakinolide處理后瑞士3T3細(xì)胞中肌動蛋白的重組。瑞士3T3細(xì)胞用jasplakinolide（Jaspl）處理或不處理（Untr），并使用BK037測定G-肌動蛋白（G）和F-肌動蛋白（F）含量。用jasplakinolide治療導(dǎo)致F-肌動蛋白的有效積累。

問題1：在哪個步驟可以停止檢測？

答案1： 直到在37℃下旋轉(zhuǎn)100,000xg 1小時后才能停止測定。在高速離心后，可將上清液（G-肌動蛋白）與SDS上樣緩沖液混合并冷凍備用。應(yīng)使用解聚劑和水重懸沉淀（F-肌動蛋白），然后與SDS上樣緩沖液混合并冷凍備用。在冷凍時，F(xiàn)-肌動蛋白解聚，因此在冷凍樣品之前必須將F-肌動蛋白與G-肌動蛋白分離以分離樣品以準(zhǔn)確測量F-肌動蛋白和G-肌動蛋白比率。

問題2：這種檢測有多敏感？

答案2： 該檢測方法可以檢測到G-肌動蛋白與F-肌動蛋白比例的15％變化。每個條件應(yīng)一式兩份進行并重復(fù)幾次，因為實驗之間的測定再現(xiàn)性可以變化10-20％。

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參考

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貨號	品名	規(guī)格	品牌
BK165-S	Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK165	Signal-Seeker™ SUMOylation 1 Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK163-S	Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK163	Signal-Seeker™ Acetyl-Lysine Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK160-S	Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK160	Signal-Seeker™ Phosphotyrosine Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK162-S	Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK162	Signal-Seeker™ SUMOylation 2/3 Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
BK161-S	Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit	(10 assay)	cytoskeleton
BK161	Signal-Seeker™ Ubiquitination Detection Kit	(30 assay)	cytoskeleton
AAC04-Beads	Acetyl-Lysine Affinity Beads	ea	cytoskeleton
APY03-Beads	Anti-Phosphotyrosine Affinity Beads	ea	cytoskeleton
ASM11-Beads	SUMOylation 1 Affinity Beads	ea	cytoskeleton
ASM24-Beads	SUMOylation 2/3 Affinity Beads	ea	cytoskeleton
UBA01-Beads	Ubiquitination Affinity Beads	ea	cytoskeleton
CIG02-Beads	Acetyl-Lysine Control Beads	ea	cytoskeleton
CIG03-Beads	SUMO1 IP Control Beads	ea	cytoskeleton
CIG01-Beads	IgG Control Beads	ea	cytoskeleton
CUB02-Beads	Ubiquitination Control Beads	ea	cytoskeleton
BLR01	BlastR™ Rapid Lysate Prep Kit	ea	cytoskeleton
BLR02	BlastR™ Rapid Filtration Kit	ea	cytoskeleton
AAC02	Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (7B1)	ea	cytoskeleton
AAC03	Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)	ea	cytoskeleton
AAC03-HRP	Acetyl Lysine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (19C4B2.1)	ea	cytoskeleton
AAC01	Acetyl Lysine Antibody Mouse Monoclonal (3C6.08.20)	ea	cytoskeleton
APY03	Phosphotyrosine Antibody Mouse Monoclonal (27B10)	ea	cytoskeleton
APY03-HRP	Phosphotyrosine-HRP Antibody Mouse Monoclonal (27B10)	ea	cytoskeleton
ASM01	SUMO1 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 5D8B16)	ea	cytoskeleton
ASM24	SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 11G2)	ea	cytoskeleton
ASM23	SUMO-2/3 Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)	ea	cytoskeleton
ASM23-HRP	SUMO-2/3-HRP Antibody Mouse Monoclonal (Clone 12F3)	ea	cytoskeleton
AUB01	Ubiquitin Antibody Mouse Monoclonal	ea	cytoskeleton
AUB01-HRP	Ubiquitin-HRP Antibody Mouse Monoclonal	ea	cytoskeleton
PHDG1	Acti-stain 488 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDH1	Acti-stain 555 phalloidin	ea	cytoskeleton
PHDN1	Acti-stain 670 phalloidin	ea	cytoskeleton
BK001	Actin Binding Protein Spin-Down Assay Biochem Kit: rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
BK003	Actin Polymerization Biochem Kit (fluorescence format): rabbit skeletal muscle actin	ea	cytoskeleton
AKL95	Actin protein (>95% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AD99	Actin protein (>99% pure): bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
AS99	Actin protein (>99% pure): chicken gizzard muscle	ea	cytoskeleton
AKL99	Actin protein (>99% pure): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AKF99	Actin protein (pre-formed filaments): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AP05	Actin protein (pyrene labeled): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
APHR	Actin protein (rhodamine): human platelet	ea	cytoskeleton
AR05	Actin protein (rhodamine): rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
AT01	Alpha-actinin protein: rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
RP01P	Arp2/3 protein complex: porcine brain	ea	cytoskeleton
CS-TFC01	Cardiac Thin Filament Complex (CTFC)	ea	cytoskeleton
CF01	Cofilin 1 protein: human recombinant	ea	cytoskeleton
HPG6	Gelsolin protein: Homo sapiens recombinant	ea	cytoskeleton
MH01	Heavy meromyosin protein	ea	cytoskeleton
CS-MH03	Heavy Meromyosin Protein (HMM Fragment)	ea	cytoskeleton
CS-MYS03	Myosin - cardiac S1 fragment	ea	cytoskeleton
CS-MYS04	Myosin - skeletal muscle S1 fragment	ea	cytoskeleton
CS-MYS05	Myosin - smooth muscle S1 fragment	ea	cytoskeleton
MY02	Myosin II protein: rabbit skeletal muscle	ea	cytoskeleton
MY03	Myosin protein: bovine cardiac muscle	ea	cytoskeleton
PR02	Profilin 1 protein: Untagged, human recombinant	ea	cytoskeleton
PHDR1	Rhodamine Phalloidin	ea	cytoskeleton
CY-SC001	SiR-Actin Kit	ea	cytoskeleton
CY-SC013	SiR700-Actin Kit	ea	cytoskeleton
VCG03	WASP protein VCA domain: GST tagged: human	ea	cytoskeleton

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