您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)! 登錄| 免費(fèi)注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏商鋪|
當(dāng)前位置:上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司>>技術(shù)文章>>SGI-DNA CE1000-50K 說明書
世界*實(shí)驗(yàn)材料供應(yīng)商 SGI-DNA正式授權(quán)上海起發(fā)為其中國代理, SGI-DNA在一直是行業(yè)的*,一直為廣大科研客戶提供zui為的產(chǎn)品和服務(wù),上海起發(fā)一直秉承為中國科研客戶帶來的產(chǎn)品,的服務(wù),簽約 SGI-DNA就是為了給廣大科研客戶帶來更加完善的產(chǎn)品和服務(wù),您的滿意將是我們zui大的收獲
SGI-DNA中國代理, SGI-DNA上海代理, SGI-DNA北京代理,SGI-DNA廣東代理, SGI-DNA江蘇代理SGI-DNA湖北代理,SGI-DNA天津,SGI-DNA黑龍江代理,SGI-DNA內(nèi)蒙古代理,SGI-DNA吉林代理,SGI-DNA福建代理, SGI-DNA江蘇代理, SGI-DNA浙江代理, SGI-DNA四川代理,
SGI-DNA是Synthetic Genomics,Inc(SGI)的全資子公司,成立于2013年,總部位于加利福尼亞州La Jolla。
SGI-DNA基于克雷格·文特爾(J.Craig Venter),漢密爾·史密斯(Ham Smith),克萊德·哈奇森(Clyde Hutchison),丹·吉布森(Dan Gibson)及其團(tuán)隊(duì) 等科學(xué)家的科學(xué)進(jìn)步和突破,利用*的專有DNA技術(shù)生產(chǎn)復(fù)雜的合成基因和試劑。SGI-DNA還提供全面的基因組服務(wù),包括全基因組測序,文庫設(shè)計(jì)和其他生物信息服務(wù)。
SGI-DNA負(fù)責(zé)SGI合成DNA業(yè)務(wù)的所有商業(yè)方面,并專注于與學(xué)術(shù)和商業(yè)研究人員的戰(zhàn)略業(yè)務(wù)關(guān)系。
使用這種高度純化的酶,進(jìn)行有針對性的指導(dǎo)RNA指導(dǎo)的雙鏈DNA切割。帶有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶是一種含有核定位信號(NLS)的純化的重組化膿性鏈球菌(Streptococcus pyogenes) Cas9蛋白。當(dāng)與適當(dāng)設(shè)計(jì)的引導(dǎo)RNA(gRNA)復(fù)合時,XactEdit™Cas9核酸酶介導(dǎo)位點(diǎn)特異性的靶向雙鏈DNA切割。將Cas9:gRNA復(fù)合物(RNP)引入細(xì)胞產(chǎn)生雙鏈DNA斷裂(DSB),其已經(jīng)用于多種靶向基因組編輯研究,例如同源敲入和基因敲除。
XactEdit™Cas9核酸酶可作為試劑盒或作為獨(dú)立的酶使用,濃度為1 mg / mL或10 mg / mL,可配制的導(dǎo)向RNA(gRNA)靶向DNA消化。純化至> 90%均一性,XactEdit™Cas9不顯示非特異性核酸酶活性。這些性能,以及低內(nèi)毒素水平,使XactEdit™Cas9成為各種應(yīng)用的理想選擇。XactEdit™酶可用于體外切割分析,或通過電穿孔或轉(zhuǎn)染引入細(xì)胞以靶向基因組序列。與載體或基于mRNA的Cas9系統(tǒng)不同,XactEdit™Cas9 RNP復(fù)合物不需要轉(zhuǎn)錄或翻譯,可以在進(jìn)入細(xì)胞后立即行動。
圖2. 使用不同量的XactEdit™Cas9核酸酶(NLS)和gRNA的體外活性。為了確定使用的XactEdit?Cas9核酸酶和gRNA的zui有效量,進(jìn)行體外活性測定。在每條泳道中,將100ng對應(yīng)于同源框轉(zhuǎn)錄因子Emx1的770bp DNA片段與量的XactEdit TM Cas9蛋白和gRNA一起溫育。XactEdit™Cas9:gRNA復(fù)合物的特異性切割產(chǎn)生兩個片段(283 bp和487 bp)。數(shù)據(jù)表明,XactEdit?Cas9蛋白使用不同量的輸入酶和gRNA有效地和特異性地切割靶位點(diǎn)處的底物。泳道1中顯示的分子量(MW)標(biāo)記是1kb梯。
圖3. 具有NLS的XactEdit™Cas9核酸酶與其他市售Cas9(NLS)核酸酶相比的體內(nèi)活性。在體內(nèi)將兩種不同批次的XactEdit TM Cas9核酸酶的核酸酶活性與來自供應(yīng)商T和N的Cas9核酸酶的核酸酶活性進(jìn)行比較。對于每個測定,使用1μgCas9和200ng體外轉(zhuǎn)錄的指導(dǎo)RNA形成Cas9:gRNA復(fù)合物, Emx1基因。通過電穿孔將復(fù)合物引入HEK 293T細(xì)胞。通過突變檢測分析(圖A,左)和MiSeq TM分析(圖B,右)檢查Cas9雙鏈斷裂(DSB)頻率。在圖A中,由DSB產(chǎn)生的序列在瓊脂糖凝膠電泳中顯示為裂解產(chǎn)物,表明Cas9誘導(dǎo)的DSB位點(diǎn)。泳道1和8是分子量(MW)標(biāo)記(來自New England Biolabs的Quick-Load 2-Log DNA ladder)。在圖B中,靶位點(diǎn)的MiSeq TM測序的定量分析顯示為轉(zhuǎn)染細(xì)胞裂解的百分比。
圖4. XactEdit™Cas9的反相HPLC分析。使用反相HPLC分析10μgXactEdit TM Cas9。Zorbax 300SB-C3柱,流動相A =在水中的0.1%TFA,流動相B =在乙腈中的0.1%TFA,在1.0mL / min,40℃,214nm檢測下梯度= 5-100%B 30分鐘。
圖5.還原XactEdit™Cas9的SDS-PAGE。使用還原性SDS-PAGE分析XactEdit Cas9。4-15%Bio-Rad TGX凝膠,Bio-Rad Precision Plus蛋白標(biāo)記,SYPRO-Orange染色。
圖6. XactEdit™Cas9的批次到批次活動比較 使用針對5.5kb目標(biāo)設(shè)計(jì)的三種不同指導(dǎo)RNA(gRNA-1,gRNA-2和gRNA-2)比較兩種不同批次的XactEdit™Cas9的活性的體外活性測定。gRNA-SC是不識別目標(biāo)DNA的混雜的陰性對照RNA。XactEdit™Cas9酶的存在或不存在分別由+和 - 表示。通過瓊脂糖凝膠電泳分析樣品以分離模板DNA(5.5kb,未切割)和消化產(chǎn)物(可變尺寸)。
Products | Catalog # | Pack Size |
---|---|---|
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) kit Includes 10X XactEdit™ Digestion Buffer, Template for scrambled gRNA, Nuclease-free water | CE1000-50K | 50 µg |
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 1 mg/mL | CE1000-50 | 50 µg |
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 1 mg/mL | CE1000-250 | 5 x 50 µg |
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 10 mg/mL | CE1001-250 | 250 µg |
XactEdit™ Cas9 Nuclease (NLS) 10 mg/mL | CE1001-1000 | 1000 µg |
我們公司zui大優(yōu)勢是強(qiáng)大的采購,
1:基本什么都能進(jìn)口,血清,抗體,耗材,還有部分限制進(jìn)口的,
2:貨品全,現(xiàn)經(jīng)營過700多個品牌,基本所有生物試劑耗材都可以進(jìn)口,特別是冷偏的產(chǎn)品那就更有優(yōu)勢,
3:提供加急服務(wù),一般1-2周到貨,超過時限加急費(fèi)全免
4:價格公道,絕大部分價格有優(yōu)勢,當(dāng)然不能保證100%產(chǎn)品都是,因?yàn)橐馕吨鴽]有服務(wù).
5:良好的信譽(yù),大部分客戶我們提供貨到付款服務(wù),客戶包括清華,北大 交大 復(fù)旦,中山等100多所大學(xué),ROCHE,阿斯利康,國藥 ,fisher等500多家公司
6:我們*代理的品牌有:Antibody Research Corporation,arcticzymes,Biorelevant,AmberGen, Inc. ,clemente-associates,clodronaiposomes,Columbia Biosciences,enzyme research,Gene Bridges GmbH,Genovis,AmberGen, Inc. Biotechnology GmbH,Haematologic Technologies HTI Haemtech,hookelabs,Immudex,Innovative Research of America,inspiralis ,List Biological Laboratories, Inc.,lumafluor,Microsurfaces,multiplicom,nanotools,Pel-Freez Biologicals,pentapharm,progen,Protein Ark,QA-Bio,Inc,QA-Bio,IncQuickZyme Biosciences,Teknova,TriLink BioTechnologies, Inc.,Zyagen Laboratories 等
7:我們還是invitrogen,qiagen,Midland BioProducts Corporationam,sigma;neb,roche,merck, rnd,BD, GE,pierce,BioLegend等知名*批發(fā),歡迎合作。
請輸入賬號
請輸入密碼
請輸驗(yàn)證碼
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé),化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。
溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險,建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。