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          上海恒遠生物解析檢測VEGF促進血管內皮細胞增殖活性的方法

血管生成（Angiogenesis）是指從已有的毛細血管或毛細血管后靜脈發(fā)展而形成新的血管，主要包括：激活期血管基底膜降解；血管內皮細胞的激活、增殖、遷移；重建形成新的血管和血管網，是一個涉及多種細胞的多種分子的復雜過程。血管形成是促血管形成因子和抑制因子協調作用的復雜過程，正常情況下二者處于平衡狀態(tài)，一旦此平衡打破就會激活血管系統(tǒng)，使血管生成過度或抑制血管系統(tǒng)使血管退化。

1．用牛腎上腺內皮細胞（AEC）檢測VEGF活性

1）取12孔細胞培養(yǎng)板，每孔加0.5ml含1×10⁴牛腎上腺血管內皮細胞的細胞培養(yǎng)液。

2）用含0.2％明膠的PBS系列稀釋待測樣品，每孔加0.5ml稀釋樣品，以后隔天更換同樣濃度的稀釋樣品；對照孔加0.5ml細胞培養(yǎng)液。在37℃ 5％ CO₂的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4～5天。

3）用MTT法、[³H]脫氧胸苷摻入法或直接用胰蛋白酶消化后計數細胞的方法計數生長的細胞數。繪制劑量-反應曲線，取能引起50％zui大增殖反應的zui高樣品稀釋度為1U VEGF。

上海恒遠生物供應的血管內皮生長因子試劑盒（英文：vascular endothelial growth factor，簡稱：VEGF），早期亦稱作血管通透因子（英文：vascular permeability factor，簡稱：VPF)，是血管內皮細胞特異性的肝素結合生長因子（heparin-binding growth factor），可在體內誘導血管新生（induce angiogenesis in vivo）。本月主推大鼠，小鼠，人等種屬試劑盒，咨詢。

2．用人臍帶靜脈內皮細胞（HUVE）檢測VEGF活性

1）分離HUVE。取明膠包被的48孔細胞培養(yǎng)板，每孔加6000個細胞，含15mmol/L Hepes、20％胎牛血清和抗生素的199培養(yǎng)液，以及用同樣培養(yǎng)液系列稀釋的待測樣品，總體積0.4ml。在37℃ 5％ CO₂的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12小時。

2）加入0.64μCi（23.68kBq）[³H]脫氧胸苷，繼續(xù)培養(yǎng)60小時，用含1％ BSA的pH7.5 Hank液洗滌各孔。用含0.1mol/L NaOH的0.2mol/L Na₂CO₃溶液溶解細胞，釋放DNA。溶解物在液體閃爍計數儀上計數放射性摻入量，同上決定樣品中VEGF的含量。