化工儀器網
技術文章
小鼠血清白蛋白(ALB)注意事項！
閱讀：2137 發(fā)布時間：2022-6-28【產品名稱】
中文名稱：小鼠血清白蛋白(ALB)酶聯免疫試劑盒
【包裝規(guī)格】
96T/盒
【預期用途】
僅供科研使用，本試劑盒用于測定小鼠血清樣本中血清白蛋白(ALB)含量。
【試劑盒組成】
序號中文名稱 英文名稱規(guī)格
130倍濃縮洗滌液Wash solution(30X)20ml×1瓶
2酶標試劑HRP-Conjugate reagent6ml×1瓶
3酶標包被板Microelisa stripplate12孔×8條
4樣品稀釋液Sample diluent6ml×1瓶
5顯色劑A液Chromogen Solution A6ml×1瓶
6顯色劑B液Chromogen Solution B6ml×1/瓶
7終止液Stop solution6ml×1瓶
8標準品（960μg/mL）Standard0.5ml×1瓶
9標準品稀釋液Standard diluent1.5ml×1瓶
10說明書Product Description1份
11封板膜Sealing plate membrane 2張
12密封袋Sealing bag1個
注意：使用前請檢查試劑盒中試劑的標簽和數量與表格是否一致。
需要但未提供的材料及耗材
1、酶標儀（建議儀器使用前提前預熱）
2、精密移液器、吸頭、加樣槽
3、蒸餾水或去離子水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、EP管
7、無粉一次性乳膠手套
【儲存條件及有效期】
1、2-8℃保存，切勿冷凍，有效期6個月。
2、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
注意：試劑盒內酶標條可拆卸，按實驗需求可分多次使用；使用后的剩余試劑盒建議在實驗后1 個月內使用完畢。產品過期時間以盒子上的標簽為準，保質期內所有組分都確保是穩(wěn)定的。
【適用儀器】
半自動的酶標儀，如Thermo MK3，或者國產酶標儀。
【樣本要求】
1.樣本類型和采集
血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置0.5-2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
細胞裂解液: 吸棄培養(yǎng)液，用PBS（0.01 M，pH 7.4）將細胞洗一遍。用細胞刮刮下細胞（不能用胰酶和EDTA 處理），加入2-5 mL PBS（0.01 M，pH 7.4）。懸浮細胞可省略。收集細胞懸液，4℃ 1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，用預冷的PBS潤洗3次。加入適量的預冷PBS或非變性細胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細胞,通常6孔板一個孔的細胞量需要150-250μL PBS重懸。 將樣品放入-20℃或-80℃，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品，反復凍融3次，使細胞充分裂解,也可將樣品進行超聲破碎，以達到裂解的目的。4℃ 10000×g 離心10min，除去細胞碎片，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2.樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下，可以儲存72h，在- 20℃或-80℃可以儲存6個月及以上。樣本收集后，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存，避免反復凍融。
注意：
1.試劑準備：試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用。準備一次實驗所需要的酶標條，其它的可從微孔板上拆下，密封，按照說明書要求保存，以備下次使用。
2.加樣：實驗操作中請使用一次性的滅菌吸頭，避免污染。加樣時注意不要有氣泡產生，將樣品加于酶標板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。與反應試劑加入一樣，加樣過程中第一個孔與最后一個孔加樣時間間隔盡量小（一般控制在10 分鐘以內），如果太大，將會導致不同的“預溫育"時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。為了測值的準確性，推薦設置復孔進行實驗。
3.溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實驗時請將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內，以避免液體蒸發(fā)，洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài)，同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。
4.洗滌：濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。充分洗滌非常重要，在每次洗滌過程中，都要將洗滌液*甩干。洗滌過程中反應孔內殘留的洗滌液應在吸水紙上拍干，勿將吸水紙直接放入反應孔中吸水，同時要輕輕擦除板底殘留的液體和手指印，避免影響最后的酶標儀讀數。如果使用自動洗板機，請在熟練使用后再用于正式實驗過程中。
5.反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化，如觀察到顏色較深，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應，避免反應過強而影響酶標儀光密度讀數。
6.底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。
【注意事項】
1.請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。
2.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
3.為免交叉污染，要避免重復使用手中的吸頭和試管。
4.要嚴格避免操作過程中酶標板干燥。干燥會使酶標板上生物成份迅速失活。
5.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
6.顯色時間供參考，因用戶實驗室條件差異，最佳顯色時間會有所不同。
7.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
8.本試劑不同批號組分不得混用。
9.揭封板膜和覆蓋封板膜時應避免用力過大導致液體濺出。
【結果計算】
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。