徠卡倒置顯微鏡的掃描電鏡

徠卡倒置顯微鏡所有的掃描探針顯微鏡都具有某些共同特點(diǎn)。所有的儀器都有一個(gè)探針和一個(gè)觀測(cè)表面。兩者相距十分近。徠卡體視顯微鏡通過(guò)某種壓電裝置，使兩者相對(duì)掃描。為檢測(cè)探針與表面的相互作用，還需要一個(gè)電路裝置。這便是掃描探針顯微鏡的大致結(jié)構(gòu)，而探針與表面相互作用的性質(zhì)便決定了掃描探針顯微鏡的類(lèi)型。

徠卡倒置顯微鏡由于高分辨掃描電鏡的間世，為用表面標(biāo)記技術(shù)觀察細(xì)胞表面形態(tài)和區(qū)別兩類(lèi)紉胞群與其表面形態(tài)相的機(jī)能提供了條件。用此技術(shù)方法可研究細(xì)胞表面抗原、受體的性質(zhì)，分布及運(yùn)動(dòng)。在原則上，透射電鎊與熒光顯微鏡用的免疫標(biāo)記技術(shù)也適用于免疫掃描電子顯微術(shù)。但由于徠卡倒置顯微鏡掃描電鏡與透射電鏡的成像原理不同，因此對(duì)免疫掃描電境術(shù)的標(biāo)記物有些特殊要求。這些要求是：

1．清晰、容易識(shí)別的形狀‘對(duì)透射電鏡的標(biāo)記物要求電子致密度高，掃描電鏡的標(biāo)記物電子密度不是重要問(wèn)題，而形狀是識(shí)別的重要因素。

2．大小適宜：一般而言?huà)呙桦婄R分辨率低于透射電鏡，此外掃描電鏡標(biāo)本要金屑鍍膜，這都影響樣品表面結(jié)構(gòu)的分辨。因此標(biāo)記物若太小、結(jié)構(gòu)過(guò)于微細(xì)，就不能與樣品表面固有結(jié)構(gòu)區(qū)別，但標(biāo)記物過(guò)于大，又不能明確定出去面抗原位置，因此標(biāo)記物大小要兼顧以上兩方面。

3.化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，在標(biāo)本處理過(guò)程中不會(huì)被損壞品制備過(guò)程中能牢固地結(jié)合。

4.對(duì)細(xì)胞表面的固有親合力差。

如果樣品以苯乙烯樹(shù)脂做為包埋劑，徠卡倒置顯微鏡再行割斷法做掃描電鏡觀察是十分方便的。因?yàn)楸揭蚁┚酆虾?，氧化丙烯及醋酸異戊酌等很容易將其溶解，多次更換溶劑便可將苯乙烯清除干凈。因此，在制做透射電鏡標(biāo)本時(shí)，多做出幾個(gè)包埋膠囊樣品，待聚合后，按上述方法割斷，將割斷好的樣品放在氧化丙烯中，約2小時(shí)后便可經(jīng)酷酸異戊酷置換、臨界點(diǎn)干燥。

除樹(shù)脂割斷法外，徠卡倒置顯微鏡尚有有機(jī)溶劑(酒糟、酷酸異戊圈等)割斷法；水溶性包埋劑(二甲基亞礬、甘油等)割斷法及其它(冷凍、氟里昂等)割斷法，操作都很容易。再以酒精割斷法為例：樣品固定后用酒精脫水，當(dāng)脫水完成后，將樣品投入預(yù)先裝有無(wú)水乙醇的膠囊中(避免出現(xiàn)氣泡)。將膠囊放在低溫裝置內(nèi)使乙醇固化。進(jìn)行樣品割斷。割斷的樣品立即進(jìn)入置于室溫的無(wú)水乙醇中，待乙醇融化后移入醋酸異戊酷、進(jìn)行臨界點(diǎn)干保。

如果徠卡倒置顯微鏡應(yīng)用高分辨率掃描電鏡．金標(biāo)記是理想的。鐵蛋白雖然有高電子密度，但分子畢竟大小，因而應(yīng)用有限。

徠卡倒置顯微鏡關(guān)于抗體的純化與透射電鏡所用的有關(guān)方法相同，抗體與標(biāo)記物的偶聯(lián)也不在此贅述。

備注：徠卡倒置顯微鏡的掃描電鏡部分文章由北京中儀光科科技發(fā)展有限公司，編輯整理上傳。