化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
上海恒遠(yuǎn)告知：抗磷脂抗體檢測(cè)方法
閱讀：1284 發(fā)布時(shí)間：2014-3-7檢測(cè)APLAzui敏感試驗(yàn)是1983年介紹的ACLA的檢測(cè)，后來這種方法得到不斷改進(jìn)，血清、血漿均可用于分析。該方法即為酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)：用純心磷脂的無水乙醇溶液(50／11)包被聚苯乙烯反應(yīng)板，常規(guī)方法洗滌后，用10％的BSA封閉；加l：50稀釋的待測(cè)血清，37~C孵育30rain；洗板后，再分別加入HRP標(biāo)記的抗人γ(1：1 500)、抗α(1：1 000)、抗μ(1；8 000)鏈的F(ab)2片段，37℃30min然后，OPD顯色，加終止液。492nm波長測(cè)吸光度值。結(jié)果以正常對(duì)照組平均值±2S為正常上下限。
這種以心磷脂作為靶抗原的ELISA方法，由于交叉反應(yīng)，ACLA可能會(huì)與其他磷脂結(jié)合。
操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng)：避免脫補(bǔ)體作用(加熱血清至56℃)，否則會(huì)引起假陽性結(jié)果；反復(fù)凍融樣本也會(huì)導(dǎo)致ACLA結(jié)合力下降；微孔板也很重要。并且，在包被心磷脂同一板上，還可通過
檢測(cè)APLAzui敏感試驗(yàn)是1983年介紹的ACLA的檢測(cè)，后來這種方法得到不斷改進(jìn)，血清、血漿均可用于分析。該方法即為酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)：用純心磷脂的無水乙醇溶液(50／11)包被聚苯乙烯反應(yīng)板，4~C；常規(guī)方法洗滌后，用10％的BSA封閉；加l：50稀釋的待測(cè)血清，37~C孵育30rain；洗板后，再分別加入HRP標(biāo)記的抗人γ(1：1 500)、抗α(1：1 000)、抗μ(1；8 000)鏈的F(ab)2片段，37℃30min然后，OPD顯色，加終止液。492nm波長測(cè)吸光度值。結(jié)果以正常對(duì)照組平均值±2S為正常上下限。
這種以心磷脂作為靶抗原的ELISA方法，由于交叉反應(yīng)，ACLA可能會(huì)與其他磷脂結(jié)合。
操作中應(yīng)注意以下事項(xiàng)：避免脫補(bǔ)體作用(加熱血清至56℃)，否則會(huì)引起假陽性結(jié)果；反復(fù)凍融樣本也會(huì)導(dǎo)致ACLA結(jié)合力下降；微孔板也很重要。并且，在包被心磷脂同一板上，還可通比較加和不加β2-GPI兩微孔問的結(jié)合活性，區(qū)別β2-GPI依賴與不依賴的ACLA。
流式細(xì)胞術(shù)亦被應(yīng)用于ACLA的檢測(cè)，可同時(shí)檢測(cè)APLA同種型。
比較加和不加β2-GPI兩微孔問的結(jié)合活性，區(qū)別β2-GPI依賴與不依賴的ACLA。
流式細(xì)胞術(shù)亦被應(yīng)用于ACLA的檢測(cè)，可同時(shí)檢測(cè)APLA同種型。