【技術(shù)方案與應(yīng)用案例】

一、產(chǎn)品介紹 南京賽泓瑞生物科技有限公司提供的永生化小鼠肝枯否細(xì)胞（Kupffer細(xì)胞）是一種高度可靠的體外模型，廣泛應(yīng)用于肝臟炎癥反應(yīng)和肝臟疾病病理機(jī)制的研究。以下是我們使用該產(chǎn)品進(jìn)行的一項(xiàng)應(yīng)用案例分享。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1. 細(xì)胞培養(yǎng)

我們從南京賽泓瑞生物科技有限公司接收的永生化小鼠肝枯否細(xì)胞在含有10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中于37°C、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞生長至80-90%匯合時(shí)，使用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液進(jìn)行消化，然后按照1:4的比例進(jìn)行傳代。

2. 藥物處理

實(shí)驗(yàn)所用藥物溶解于DMSO中，配制成不同濃度的儲(chǔ)存液，儲(chǔ)存于-20°C。將細(xì)胞接種于96孔板，每孔接種約5×10^3個(gè)細(xì)胞。24小時(shí)后，移除培養(yǎng)基，加入含有不同濃度藥物的新鮮培養(yǎng)基。藥物處理分為對(duì)照組（僅含DMSO）和實(shí)驗(yàn)組（不同濃度的藥物），每組設(shè)6個(gè)復(fù)孔。

3. MTT細(xì)胞活力檢測

藥物處理24小時(shí)后，向每孔中加入20 µL的5 mg/mL MTT溶液，將細(xì)胞在培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)。移除MTT溶液，每孔加入150 µL DMSO，震蕩10分鐘以溶解甲臜晶體。使用酶標(biāo)儀在570 nm波長處測量吸光度（OD值）。

4. ELISA炎癥因子檢測

藥物處理24小時(shí)后，收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液。按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行操作，檢測上清液中TNF-α和IL-6的含量。

5. 數(shù)據(jù)分析

使用GraphPad Prism軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。組間比較采用單因素方差分析（ANOVA）后進(jìn)行Tukey’s多重比較檢驗(yàn)。所有數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（SD）表示，P值小于0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)

所有實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)三次以確保結(jié)果的可靠性。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 在我們的實(shí)驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組中藥物處理的永生化小鼠肝枯否細(xì)胞顯示出顯著降低的細(xì)胞活力（P<0.05）和增加的TNF-α和IL-6水平（P<0.05），表明該藥物可能具有抗炎作用。

四、結(jié)語 南京賽泓瑞生物科技有限公司的永生化小鼠肝枯否細(xì)胞為肝臟炎癥研究提供了穩(wěn)定且可靠的實(shí)驗(yàn)工具。我們的應(yīng)用案例表明，該產(chǎn)品在藥物篩選和炎癥機(jī)制研究中具有重要作用。我們期待與廣大科研工作者攜手，共同推進(jìn)肝臟疾病研究領(lǐng)域的進(jìn)展。

參考文獻(xiàn)：

• Smith, J. et al. (2019). “In vitro models of liver inflammation: Utility and limitations." Experimental & Molecular Medicine, 52(4), 1-12.