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熒光二抗的選擇——Dylight熒光與傳統(tǒng)熒光標記的比較
顧名思義，熒光二抗通常指代的就是帶熒光團標記的二抗，這樣的二抗可以通過觀察其在不同波長下熒光的強度來確定其二抗的含量。常見的熒光團包括FITC、Rhodamine、TexasRed、PE、Cy系列等。比如FITC即異硫氰酸熒光素，是目前應(yīng)用zui廣泛的熒光素。zui大吸收光波長為490～495nm，zui大發(fā)射光波長為520～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。其優(yōu)勢是分子量較小為389.4，每一個抗體可標記幾個FITC分子，而且人眼對黃綠色較為敏感，因此具有很好的對比度其缺點是淬滅快。羅丹明（R -
人類原代細胞一覽推薦的培養(yǎng)基*產(chǎn)品接種密度溶解后傳代標記物**種群加倍C-22070人類心肌細胞（HCM）10,000-15,000cellspercm2P2Sarcomericalpha-Actinin+Slowmusclemyosin+15C-27101人類軟骨細胞（HCH）10,000-20,000cellspercm2P2Differentiationtested10C-22010C-22011人類臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）5,000-10,000cellspercm2P1vWF+CD
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心肌細胞人類心肌細胞（HCM）從成年人心臟的心室部分分離。這些心肌細胞中肌原纖維節(jié)α-輔肌動蛋白和慢肌球蛋白顏色均為陽性。HCM可用于心臟疾病的活體外研究，例如心臟肥大，以及生理學和藥理學研究。與新鮮分離的肌細胞不同，培養(yǎng)的HCM可以用于長期實驗，如研究細胞因子、機械牽張或細胞-細胞相互作用的長期作用。Thecellshavebeentested:Sarcomericalpha-actininpositive,Slowmusclemyosinpositive,CD90negativeFigure
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膠原誘導的關(guān)節(jié)炎模型（CIA）實驗方案1.牛II型膠原溶解在0.05mol/ml的乙酸中，濃度為2mg/ml，攪拌4°C過夜。2.注射前，II膠原溶液與同體積的IFA在冰浴中*乳化。3.*天，每只大鼠尾根部皮內(nèi)注射0.1mlCII/IFA乳化劑（濃度為1mg/ml）。4.第7天，每只大鼠以同樣的方式再次注射。5.注射后，大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)根據(jù)肉眼評分系統(tǒng)每周兩次進行評價。0－正常1－一個足爪腫脹和/或發(fā)紅2－2個相關(guān)關(guān)節(jié)腫脹和/或發(fā)紅3－2個相關(guān)關(guān)節(jié)腫脹和/或發(fā)紅4－整個足爪嚴重炎癥每只大小鼠關(guān)節(jié)炎
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乳腺癌MCF-7細胞株裸鼠移植瘤模型：用含50U/ml慶大霉素、15%滅活小牛血清和10p-g/ml人胰島素的RPMI1640培養(yǎng)液，在370C和5%C02充分濕化條件下培養(yǎng)人乳腺癌細胞株MCF-7備用。選30天齡BALB/cA雌性裸小鼠，體重為15～17g。每周2次腹腔注射苯甲酸雌二醇10mg/kg，持續(xù)2周。將人乳腺癌MCF-7細胞5×107接種于雌二醇處理過的裸小鼠右側(cè)腋窩皮下，建成人乳腺癌MCF-7裸小鼠移植瘤，接種后隔天腹腔注射苯甲酸雌二醇10mg/kg。移植瘤在裸小鼠體內(nèi)持續(xù)傳3代后
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http://www.genecool.com/?fromuser=%E6%9D%A8%E5%BB%BA%E8%BE%89圖解blast驗證引物教程——以文獻報道的人類的ABCG2的引物為例1、進入網(wǎng)頁：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/2、點擊BasicBLAST中的nucleotideblast選項3、完成2操作后就進入了BasicLocalAlignmentSearchTool界面（1）在EnterQuerySequence欄中輸入引物序列：注：文獻報道A
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Real-timePCR實驗注意事項實驗中的一些好習慣加入試劑之前,把它混勻一下,以免放置時間長了濃度不均移液槍用完之后要歸到zui大計量的位置，防止久而久之彈簧失去彈性一定要記著關(guān)水浴箱，切記切記多和大家討論，同時多關(guān)注別人討論的經(jīng)驗，這幾乎是zui快提高的捷徑了所有的試劑都自己配，出了問題才好找原因防止RNA酶污染的措施1.所有的玻璃器皿均應(yīng)在使用前于180℃的高溫下干烤6hr或更長時間。2.塑料器皿可用0.1%DEPC水浸泡或用氯仿沖洗（注意：有機玻璃器具因可被氯仿腐蝕，故不能使用）。3.
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http://www.genecool.com/?fromuid=102401自己做過一些簡并引物，現(xiàn)將我利用生物信息學資源設(shè)計簡并引物的各個步驟作一個總結(jié)，各位戰(zhàn)友可將各自的心得體會寫下，以便大家交流?。?！一、利用ncbi搜索不同物種中同一目的基因的蛋白或cDNA編碼的氨基酸序列因為密碼子的關(guān)系，不同的核酸序列可能表達的氨基酸序列是相同的，所以氨基酸序列才是真正保守的。首先利用NCBI的Entrez檢索系統(tǒng)，查找到一條相關(guān)序列即可。隨后利用這一序列使用BLASTp（通過蛋白查蛋白），在整個Nr
