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            上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司

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            膠原酶 I II III IV四個(gè)型之間區(qū)別及用法

            2015-11-17  閱讀(73048)

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            消化法中常使用的酶有3種:胰蛋白酶、膠原酶I以及透明質(zhì)酸酶,透明質(zhì)酸酶多與胰蛋白酶或膠原酶聯(lián)合應(yīng)用; 膠原酶作用較緩和,能消化細(xì)胞間質(zhì)中的膠原纖維以釋放細(xì)胞,對(duì)細(xì)胞損傷小,以膠原I為主。

            胰蛋白酶(簡(jiǎn)稱胰酶)是廣泛應(yīng)用的消化劑.胰蛋白酶是一種胰臟制品,對(duì)蛋白質(zhì)有水介作用,主要作用于賴氨酸或精氨酸相連接的肽鍵,使細(xì)胞間質(zhì)中的蛋白質(zhì)水介而使細(xì)胞分散開,在常用的蛋白酶中由于產(chǎn)品的活力和純度不同,對(duì)細(xì)胞的消化能力也不同,胰蛋白酶對(duì)細(xì)胞的作用,取決于細(xì)胞類型、酶的活力、配制的濃度、消化的溫度、無機(jī)鹽離子、pH以及消化時(shí)間的長(zhǎng)短等. 胰蛋白酶作用較強(qiáng),容易造成平滑肌細(xì)胞損壞;
            膠原酶是一種從細(xì)菌中提取出來的酶,對(duì)膠原有很強(qiáng)的消化作用.適于消化纖維性組織、上皮組織以及癌組織,它對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有較好的消化作用,對(duì)細(xì)胞本身影響不大,可使細(xì)胞與膠原成分脫離而不受傷害.該酶分離效果好,即使有鈣、鎂離子存在仍有活性,故可用PBS和含血清的培養(yǎng)液配制,即操作簡(jiǎn)便又可提高細(xì)胞成活率,zui終濃度200u/mL  此酶消化作用緩和,無需機(jī)械振蕩,但膠原酶價(jià)格較高,大量使用將增加實(shí)驗(yàn)成本,所以選擇價(jià)廉物美的膠原酶是關(guān)鍵,所以不光要看重量還要看每MG的活性單位.

             

            膠原酶的化學(xué)名為膠原蛋白水解酶(Collagenase),它能在生理PH和溫度條件下特異性地水解天然膠原蛋白的三維螺旋結(jié)構(gòu),而不損傷其它蛋白質(zhì)和組織。膠原酶的化學(xué)本質(zhì)是一種蛋白質(zhì),因此,這對(duì)溫度、PH和導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性的各種因素均非常敏感,極易受到外界條件的影響而改變其本身的構(gòu)象和性質(zhì)。

            膠原酶(collagenase)是從溶組織梭狀細(xì)胞芽孢桿菌提取制備的,主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。當(dāng)擬消化的組織較硬,內(nèi)含較多結(jié)締組織或膠原成分時(shí),用胰蛋白酶解離細(xì)胞的效果較差,這時(shí)可采用膠原酶解離細(xì)胞法。 膠原酶僅對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有消化作用而對(duì)上皮細(xì)胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織,可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為zui終濃度200U/ml。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細(xì)胞膠原酶,要根據(jù)所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。

            中文名稱: I型膠原酶、II型膠原酶、IV型膠原酶、V型膠原酶

            英文名稱:Collagenase I、Collagenase II、Collagenase IV、Collagenase V

            CAS號(hào): 9001-12-1

            規(guī)格:100mg, 1g ,5

            產(chǎn)地:Worthington sigma  invitrogen

            外觀: 棕色或棕褐色結(jié)晶狀凍干粉;

            保存:-20°C

            膠原酶配制方法和胰蛋白酶的配制方法一致,只是要注意標(biāo)簽中的活性單位,zui終配制 成為200u/mL就可以了.,

            胰蛋白酶的配制、過濾除菌與分裝過程

            準(zhǔn)備樣品:干粉,PBS緩沖液,離心管兩個(gè)、凍存管20個(gè)、盒子一個(gè)、槍頭1盒、滅菌器、注射器。

            準(zhǔn)備工作:將離心管、凍存管裝載盒子中高溫高壓滅菌。

            配制:

            1.稱取胰蛋白酶:按胰蛋白酶液濃度0.25%用電子天平準(zhǔn)確稱取粉劑50mg溶入離心管PBS(PH到7.2左右)液中。攪拌混勻,置于4℃內(nèi)12小時(shí)。

            2.用注射濾器抽濾消毒:配好的胰酶溶液要在超凈臺(tái)內(nèi)用注射濾器(0.22微米微孔濾膜)抽濾除菌。

            3.分裝:將除菌之后的胰蛋白酶用移液槍分裝至

             

             

             

             

            A: Collagenase I(膠原酶I型) :  主要用于上皮、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的分離。

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            Collagenase I(膠原酶I型)

            100 mg

            476

            Worthington

            LS004196

            Collagenase I(膠原酶I型)

            1 gm

            2464

            Worthington

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            Collagenase I(膠原酶I型)

            5 gm

            10360

            Worthington

            17100-017

            Collagenase I(膠原酶I型)

            1g

            3025

            invitrogen

            C0130-100MG

            Collagenase I(膠原酶I型)

            100mg

            526.5

            sigma

            C0130-500MG

            Collagenase I(膠原酶I型)

            500MG

            1473.03

            sigma

            C0130-1G

            Collagenase I(膠原酶I型)

            1G

            2208.96

            sigma

            C0130-5G

            Collagenase I(膠原酶I型)

            5G

            6113.25

            sigma

             

             

            B: Collagenase II(膠原酶II型) : 適用于肝臟,骨,甲狀腺,心臟和唾液腺組織細(xì)胞的分離。

             

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            LS004177

            Collagenase II(膠原酶II型)

            5 gm

            10360

            Worthington

            LS004176

            Collagenase II(膠原酶II型)

            1 gm

            2464

            Worthington

            LS004174

            Collagenase II(膠原酶II型)

            100 mg

            476

            Worthington

            17101-015

            Collagenase II(膠原酶II型)

            1g

            3025

            invitrogen

            C6885-25MG

            Collagenase II(膠原酶II型)

            25MG

            508.95

            sigma

            C6885-100MG

            Collagenase II(膠原酶II型)

            100mg

            778.05

            sigma

            C6885-500MG

            Collagenase II(膠原酶II型)

            500MG

            1,980.81

            sigma

            C6885-1G

            Collagenase II(膠原酶II型)

            1G

            2,971.80

            sigma

            C6885-5G

            Collagenase II(膠原酶II型)

            5G

            7,926.75

            sigma

             

             

            C: Collagenase III(膠原酶 III型) 對(duì)哺乳動(dòng)物的組織有廣譜的消化作用

             

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            LS004182

            Collagenase III(膠原酶 III型)

            1 gm

            2464

            Worthington

            LS004183

            Collagenase III(膠原酶III型)

            5 gm

            10360

            Worthington

            LS004180

            Collagenase III(膠原酶III型)

            100 mg

            476

            Worthington

             

             

            D: Collagenase IV(膠原酶IV型):膠原酶Ⅳ包含至少7中蛋白酶成分,分子量從68-130KD不等。它能消化多種組織, 對(duì)哺乳動(dòng)物的組織有廣譜的消化作用。

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            17104-019

            Collagenase IV(膠原酶IV型)

            1g

            3025

            invitrogen

            C5138-25MG

            Collagenase IV(膠原酶IV型)

            25MG

            452.79

            sigma

            C5138-100MG

            Collagenase IV(膠原酶IV型)

            100mg

            772.20

            sigma

            C5138-500MG

            Collagenase IV(膠原酶IV型)

            500MG

            2,530.71

            sigma

            C5138-1G

            Collagenase IV(膠原酶IV型)

            1G

            4,095.00

            sigma

            C5138-5G

            Collagenase IV(膠原酶IV型)

            5G

            15,420.60

            sigma

            LS004189

            Collagenase IV(膠原酶V型)

            5 gm

            10360

            Worthington

            LS004188

            Collagenase IV(膠原酶V型)

            1 gm

            2464

            Worthington

            LS004186

            Collagenase IV(膠原酶V型)

            100 mg

            476

            Worthington

             

            E: Collagenase V(膠原酶V型): 膠原酶Ⅴ包含至少7中蛋白酶成分,分子量從68-130KD不等。它可用于胰腺小島組織的分離,結(jié)締組織分離。

             

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            LS005283

            Collagenase V(膠原酶V型)

            5 gm

            12460

            Worthington

            LS005282

            Collagenase V(膠原酶V型)

            1 gm

            2968

            Worthington

            LS005280

            Collagenase V(膠原酶V型)

            100 mg

            588

            Worthington

            C9263-25MG

            Collagenase V(膠原酶V型)

            25MG

            469.17

            sigma

            C9263-100MG

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            100mg

            625.95

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            500MG

            1,814.67

            sigma

            C9263-1G

            Collagenase V(膠原酶V型)

            1G

            2,845.44

            sigma

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            5G

            5,686.20

            sigma

             

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