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關(guān)于HPLC的常見(jiàn)問(wèn)題及解答
點(diǎn)擊次數(shù)：1914 發(fā)布時(shí)間：2011-4-14
一、問(wèn)：用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在？如何解決？
答：關(guān)于漂移問(wèn)題：
1.溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定
2.流動(dòng)相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動(dòng)相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等
3.柱子未平衡好，需對(duì)柱子進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的平衡
關(guān)于快速變化問(wèn)題
1.流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定
2.泵中有氣泡，可通過(guò)排氣等操作將氣泡趕出。
3.流動(dòng)相不合適，解決辦法為改換流動(dòng)相或使流動(dòng)相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合
二、問(wèn)：液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？
答：1.篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。
2.存在干擾峰，解決辦法為使用較長(zhǎng)的柱子，改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子
三、問(wèn)：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
答：1.樣品量不足，解決辦法為增加樣品量 醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理
2.樣品未從柱子中流出。可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子
3.樣品與檢測(cè)器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器
4.檢測(cè)器衰減太多。調(diào)整衰減即可。
5.檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)
6.檢測(cè)器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。
7.檢測(cè)池中有氣泡。解決辦法為排氣。
8.記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。
9.流動(dòng)相流量不合適。調(diào)整流速即可。
10.檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器，重作校正曲線。
四、問(wèn)：做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定，原因何在？如何解決？
答：原因可能有：
1.泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理；
2.比例閥失效，更換比例閥即可；
3.泵密封墊損壞，更換密封墊即可；
4.溶劑中的氣泡，解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣，必要時(shí)改變脫氣方法；
5.系統(tǒng)檢漏，找出漏點(diǎn)，密封即可；
6.梯度洗脫，這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。
五、問(wèn)：我購(gòu)買的HPLC柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過(guò)高，請(qǐng)問(wèn)為什么？
答：柱壓過(guò)高是HPLC柱用戶zui常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題，您可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因。 醫(yī)學(xué)教|育網(wǎng)搜集整理
1.拆去保護(hù)預(yù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問(wèn)題，若柱壓仍高，再檢查；
2.把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；
3.將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子，（此時(shí)不要連接檢測(cè)器，以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)池）。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；
4.更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說(shuō)明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請(qǐng)與。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過(guò)濾器便可避免柱壓過(guò)高的問(wèn)題，SGE提供的Rheodyne7315型過(guò)濾器就是解決這一問(wèn)題的*選擇。