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            全血基因組提取試劑盒

            閱讀:2096      發(fā)布時間:2013-6-17
            分享:
            全血基因組提取試劑盒II
            產(chǎn)品簡介:
             
            本試劑盒通過裂解紅細胞、裂解白細胞及細胞核、沉淀蛋白、分離基因組等過程從全血中提取基因組。試劑盒特點:提取的基因組DNA長度大于20kb, 可用于PCR擴增、內(nèi)切酶消化以及膜雜交等;每100ul全血樣品預期提取量1-5ug;所提基因組DNA效果好;提取過程不超過45分鐘;可室溫保存1年。與全血基因組提取試劑盒(I)不同的是裂解紅細胞及有核白細胞同時進行,省去了多個步驟,復合裂解液中含有抑制DNA酶的成分,在加熱(65°C)狀態(tài)下,可保證完整的基因組DNA的充分裂解釋放,異丙醇沉淀時,罕見渾濁的蛋白質(zhì)雜質(zhì)共沉淀。本試劑盒提供100次100ul全血樣本基因組提取的足量試劑。 本試劑盒也可用于培養(yǎng)細胞,組織基因組以及培養(yǎng)細菌或真菌基因組DNA的提取。
             
            試劑盒組成
            1、細胞復合裂解液:35ml                            2、蛋白沉淀液: 25ml×1瓶
            3、DNA溶解液: 5ml瓶                                4、說明書: 1份
            自備試劑
            本試劑盒沒有提供,但*的試劑包括:異丙醇(國產(chǎn)分析醇);70%乙醇。
            樣品
            1、 樣品要求:用于DNA提取的全血應為抗凝血(EDTA, 肝素或檸檬酸鈉抗凝),抗凝血在4°C存放5天以內(nèi)(存放時間長,DNA產(chǎn)量低),-20°C存放一個月以內(nèi), -80°C至少可存放2年均能純化出高質(zhì)量的DNA(凍存血較新鮮血產(chǎn)量低)。
            2、 全血需求量:本試劑盒可一次提取少至20-300ul,多至10ml的全血DNA,標準提取量為100ul。
             
            注:血液及組織標本應視為傳染性材料處理。
            操作程序以100ul全血為例)
            1、 細胞復合裂解液置65°C水浴中使其中的結(jié)晶溶解。
            2、 吸取100ul混勻的全血至1.5ml離心管中,加入結(jié)晶成分已溶解的細胞復合裂解液300ul,混璇器震蕩混勻20秒,置65°C水浴中反應20分鐘。
            3、 加入200ul蛋白沉淀液,上下顛倒5-6次使兩者混勻。


             

            4、 13000-16000×g,離心3-5分鐘。
             
            5、 將上清液(約500ul)轉(zhuǎn)移至新的離心管中,加入等體積異丙醇,此時可見透明的絮狀物,混勻后離心,同步驟4,傾去上清。
            6、 加入200ul 70%的乙醇溶液(基因組DNA在70%乙醇中,存于-80 C,可長期保存),來回倒置,清洗管壁,離心,同步驟4。
            7、 移去70%乙醇,倒置離心管于干凈的濾紙上,自然干燥10-15分鐘,加入33ul DNA溶解液??焖黉鰷u震蕩1-2秒,使DNA溶解液沖刷到所有沉淀的DNA。
            8、 65 C水浴1小時,或4 C過夜使DNA充分溶解(要求不嚴格的PCR試驗可縮短時間或省去該步),輕輕彈動管壁有助于溶解。


             

             
            各種容積全血基因組DNA提取所需的溶液組份量


             
             
            全血量
            復合裂解液量
            蛋白沉淀液量
            異丙醇量
            70%乙醇量
            DNA溶解液量
            100 ul
            300 ul
            200 ul
            500 ul
            200 ul
            33 ul
            300ul
            3x300 ul
            3x 200 ul
            3x500ul
            3x200ul
            3x33 ul


             

             
             

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