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《枯草芽孢桿菌黑色變種的鑒定 生物學(xué)檢測法》意見征集
2020年03月30日 14:50:11
來源：化工儀器網(wǎng) 點擊量：6621
近日，為貫徹《中華人民共和國環(huán)境保護法》，保護生態(tài)環(huán)境，保障人體健康，提高生態(tài)環(huán)境管理水平，規(guī)范生態(tài)環(huán)境監(jiān)測工作，生態(tài)環(huán)境部制定了《水質(zhì) 滅菌指示微生物（枯草芽孢桿菌黑色變種）的鑒定 生物學(xué)檢測法》。目前，標(biāo)準(zhǔn)編制單位已完成征求意見稿。按照《國家環(huán)境保護標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作管理規(guī)定》（國環(huán)規(guī)科技〔2017〕1號）要求，現(xiàn)面向全社會公開征求意見，請業(yè)內(nèi)人士認真研究并提出書面意見，于2020年4月30日前通
【化工儀器網(wǎng) 政策標(biāo)準(zhǔn)】近日，為貫徹《中華人民共和國環(huán)境保護法》，保護生態(tài)環(huán)境，保障人體健康，提高生態(tài)環(huán)境管理水平，規(guī)范生態(tài)環(huán)境監(jiān)測工作，生態(tài)環(huán)境部制定了《水質(zhì) 滅菌指示微生物(枯草芽孢桿菌黑色變種)的鑒定 生物學(xué)檢測法》。目前，標(biāo)準(zhǔn)編制單位已完成征求意見稿。按照《國家環(huán)境保護標(biāo)準(zhǔn)制修訂工作管理規(guī)定》(國環(huán)規(guī)科技〔2017〕1號)要求，現(xiàn)面向全社會公開征求意見，請業(yè)內(nèi)人士認真研究并提出書面意見，于2020年4月30日前通過信函或電子郵件的方式將意見反饋至生態(tài)環(huán)境部，逾期未反饋的按無意見處理。
據(jù)了解，枯草芽孢桿菌黑色變種由美國的 Elizabeth 分離得到，因其在含酪氨酸的培養(yǎng)基上產(chǎn)棕黑色素而得名，其作為枯草芽孢桿菌亞種，本身不具有危害性，因能產(chǎn)生對熱、紫外線、電離輻射和某些化學(xué)物質(zhì)很強抗性的芽孢，可以作為消毒劑檢測及滅菌質(zhì)量控制方面的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)菌株進行應(yīng)用。此外，枯草芽孢桿菌黑色變種也可作為炭疽桿菌的非致病性替代物，用于軍事等方面研究；用于生產(chǎn)生物表面活性劑，在環(huán)境保護、有機物質(zhì)處理和油回收等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用；用于芽孢形成、萌發(fā)、耐熱機理等研究領(lǐng)域。因此，制定上述新標(biāo)準(zhǔn)對水環(huán)境衛(wèi)生安全的監(jiān)測和評價具有重要意義。
《水質(zhì) 滅菌指示微生物(枯草芽孢桿菌黑色變種)的鑒定 生物學(xué)檢測法》規(guī)定了鑒定水中滅菌指示微生物的生物學(xué)檢測方法，適用于經(jīng)滅菌處置的廢水中指示微生物(枯草芽孢桿菌黑色變種)的鑒定。標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容框架包括：適用范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、方法原理、干擾和消除、試劑和材料、儀器和設(shè)備、樣品、分析步驟、結(jié)果與報告、特異性和穩(wěn)定性、質(zhì)量保證和質(zhì)量控制、廢物處理等。
生物學(xué)檢測法的方法原理為：滅菌處置后的廢水通過孔徑為0.45μm 的濾膜過濾，細菌和芽孢被截留在濾膜上，然后將濾膜置于酪氨酸選擇性培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)72 h～96h，枯草芽孢桿菌黑色變種產(chǎn)生的酪氨酸酶可分解利用酪氨酸形成黑色素，產(chǎn)生黑色的特征菌落。對特征菌落進行染色鏡檢和生化試驗做進一步鑒定，枯草芽孢桿菌黑色變種為革蘭氏陽性芽孢桿菌，營養(yǎng)細胞呈桿狀，單個或呈短鏈狀排列，芽孢橢圓形，中生，不膨大，能利用甘油、甘露糖，還原硝酸鹽，水解淀粉，不能利用苦杏仁苷、甘露醇。根據(jù)結(jié)果報告檢出或未檢出枯草芽孢桿菌黑色變種。
在檢測過程中，需要的試劑和材料包括酪氨酸瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、淀粉培養(yǎng)基、硝酸鹽培養(yǎng)基、甘油復(fù)紅肉湯培養(yǎng)基、甘露糖生化培養(yǎng)基、甘露醇生化培養(yǎng)基、苦杏仁苷生化培養(yǎng)基、革蘭氏染色液、芽孢染色液、硫代硫酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉、硫代硫酸鈉溶液、無菌濾膜、無菌水等。實驗用的儀器和設(shè)備包括采樣瓶、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌器、pH 計、顯微鏡、分析天平、培養(yǎng)皿、過濾裝置、移液管、三角瓶、酒精燈以及無菌室或超凈工作臺、生物安全柜等無菌操作設(shè)備。
在樣品采集方面，標(biāo)準(zhǔn)指出，如果采集的是含有活性氯的樣品，需在采樣瓶滅菌前加入硫代硫酸鈉溶液，以除去活性氯對細菌的抑制作用(每125 ml 容積加入 0.1 ml 的硫代硫酸鈉溶液)；如果采集的是重金屬離子含量較高的樣品，則在采樣瓶滅菌前加入乙二胺四乙酸二鈉溶液，以消除干擾(每125 ml容積加入0.3 ml 的乙二胺四乙酸二鈉溶液)。在樣品保存方面，標(biāo)準(zhǔn)明確，采樣后應(yīng)在2h內(nèi)檢測，否則，應(yīng)10℃以下冷藏但不得超過6h。實驗室接樣后，不能立即開展檢測的，將樣品于4℃以下冷藏并在2h內(nèi)檢測。
值得注意的是，在檢測過程中，工作人員操作時應(yīng)按要求佩戴防護器具，做好無菌防護；實驗室操作需在無菌操作設(shè)備內(nèi)進行，避免吸入呼吸道或接觸皮膚和衣物。
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